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pingdiguo金蟲 (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】細(xì)胞培養(yǎng)中漂浮物問題 已有4人參與
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我在培養(yǎng)細(xì)胞的時候，96孔板中細(xì)胞總是能貼壁生長良好。 當(dāng)轉(zhuǎn)移到24孔板中，細(xì)胞都集中在中間生長，中間感覺細(xì)胞都層疊起來了，有一部分飄起來了，而邊上還沒長滿，不知道是怎么回事？ 移到6孔板就更奇怪了，有一圈細(xì)胞呈環(huán)狀生長，其他部分沒什么細(xì)胞。 我想知道，同樣的細(xì)胞在不同板中生長不均的狀況是因為我接種的時候沒有吹勻還是板子本身所致? 漂浮起來的那一層是缺少貼壁平面，還是污染或死亡的細(xì)胞？ 是不是每次轉(zhuǎn)移細(xì)胞都需要做飼養(yǎng)細(xì)胞？如果細(xì)胞接種量不夠會造成什么影響？ 求高手指點！ |
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2樓2010-12-22 15:45:23
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3樓2010-12-22 15:46:29
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4樓2010-12-30 12:49:16
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dhd997(金幣+3):good 2011-01-02 13:15:17
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跟培養(yǎng)板沒關(guān)系，這絕對是接種的時候沒搖勻。24孔板搖不勻很容易長在中間，長老了最上面的細(xì)胞被擠在培養(yǎng)基中漂浮了。 搖板子的時候不要轉(zhuǎn)圈搖，前后用力搖3次，左右用力搖3次就可以了，細(xì)胞沉淀之前不要拿著板子到處走到處看。 至于6孔板，肉眼都可以看到細(xì)胞在底部是否均勻的。 24孔板其實不用搖，接種的時候就很勻，直接靜置待細(xì)胞沉底了再拿去培養(yǎng)箱里就好了，6孔板必須搖。 |
5樓2010-12-30 14:42:42
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dhd997(金幣+3):good 2011-01-02 13:15:39
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應(yīng)該是沒有搖勻吧，24孔板由于孔板本身的原因，不太容易搖勻，就算是勉強(qiáng)用移液器吹勻后，由于孔內(nèi)的環(huán)流，靜止以后細(xì)胞還是會聚集在中間，邊上的細(xì)胞很少。 可以在鋪板后左右前后多搖幾次，然后上下震一下，或者稍微傾斜孔板，搖勻以后放平，之后就靜置直到細(xì)胞貼壁，切記不要晃動孔板，以免再產(chǎn)生環(huán)流。 6孔板就容易多了，可以直接用移液器吹勻，或者8字搖勻都可以使細(xì)胞分布均勻。 最終細(xì)胞環(huán)狀生長可能是孔板表面不好導(dǎo)致細(xì)胞不貼壁。檢查一下孔板，如果已用多次，板的表面已經(jīng)斑駁有很多劃痕了，建議換新的孔板試一下。 |
7樓2010-12-30 17:30:31
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8樓2011-01-02 08:53:18
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9樓2011-01-02 08:55:02
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