 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 3558 | 回復: 13 | ||
luolh2004金蟲 (著名寫手)
|
[求助]
細胞培養(yǎng)相關(guān)問題 急�。。。�！
|
|
|
各位蟲友們好啊，我現(xiàn)在進行Balb/c3T3細胞培養(yǎng)實驗，現(xiàn)在遇到一系列麻煩事，特地向大家請教，謝謝了哦。 1.細胞培養(yǎng)使用的雙抗溶液（購買的），有效期已經(jīng)過了，還能夠使用嗎？因為沒有注意到，我已經(jīng)用了好長一段時間了。同樣，如果類似R1640和DMEM培養(yǎng)基過期了，是不是就不能繼續(xù)使用了？ 2.近期發(fā)現(xiàn)細胞狀態(tài)非常不好，有很多死細胞，不管是剛復蘇的細胞還是已經(jīng)復蘇一段時間的細胞，死細胞都很多。細胞生長速度沒受什么影響，算是比較正常，就是不知道為什么會有那么多死細胞，實在是找不出什么原因。 3.我目前正在做hegf表皮細胞生長因子活性檢測實驗，使用的方法是MTT法，細胞是Balb/c3T3細胞，但是每次做的實驗結(jié)果都發(fā)現(xiàn)，加入生長因子樣品和標準品的數(shù)值沒有維持培養(yǎng)基的高。希望有同樣做這個實驗的蟲友們，給點意見，或者是有機會大家多多交流下，謝謝了。 MTT實驗我已經(jīng)做了大半年了，中間總是不斷有問題出現(xiàn)，現(xiàn)在還是沒有能完成，非常著急，有做過類似實驗的蟲友們，一定要幫幫我呀，非常感謝了！ |
回復此樓» 猜你喜歡
268求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復
-
302求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復
-
311求調(diào)劑
已經(jīng)有10人回復
-
被我言中：新模板不強調(diào)格式了，假專家開始管格式了
已經(jīng)有4人回復
-
303求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復
-
考研求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復
-
085601專碩，總分342求調(diào)劑，地區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復
-
085601材料工程專碩求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復
-
一志愿天津大學化學工藝專業(yè)（081702）315分求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復
-
能源材料化學課題組招收碩士研究生8-10名
已經(jīng)有6人回復
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 大鼠氣管上皮細胞培養(yǎng)方法
已經(jīng)有9人回復
- 急求 G418篩選相關(guān)問題
已經(jīng)有4人回復
- 求助關(guān)于細胞培養(yǎng)的問題
已經(jīng)有7人回復
- 有誰養(yǎng)過4T1細胞，請教培養(yǎng)方法�。�！急��！
已經(jīng)有1人回復
- 【求助/交流】[急]細胞培養(yǎng)出現(xiàn)問題，大家看看是不是傳說中的黑膠蟲？
已經(jīng)有9人回復
- 【求助/交流】細胞培養(yǎng)污染問題
已經(jīng)有19人回復
- 【求助/交流】293t細胞懸浮培養(yǎng)相關(guān)問題
已經(jīng)有3人回復
- 【求助/交流】請教細胞培養(yǎng)的問題
已經(jīng)有14人回復
- 【求助/交流】細胞培養(yǎng)的問題
已經(jīng)有9人回復
- 【求助】關(guān)于RAW 264.7細胞培養(yǎng)的問題 求助��！
已經(jīng)有25人回復
- 求助血管內(nèi)皮細胞培養(yǎng)問題（急）
已經(jīng)有6人回復
hgq115
金蟲 (小有名氣)
- BioEPI: 1
- 應助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 1213.7
- 散金: 20
- 紅花: 1
- 帖子: 274
- 在線: 86.1小時
- 蟲號: 741583
- 注冊: 2009-04-06
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物化學
【答案】應助回帖
luolh2004(金幣+20): 謝謝，說的挺有用的 2011-07-25 20:11:51
|
1、雙抗過期影響不大的，只要不污染就行了，但是培液過期建議最好不用，本人發(fā)現(xiàn)過期培液容易造成pH不穩(wěn)定，會對細胞生長造成很大影響。 2、我以前也出現(xiàn)過這樣的問題，這應該是細胞自身的關(guān)系，很有可能是細胞在凍存的時候出現(xiàn)了問題，多傳代幾次后會慢慢減少。 3、我沒做過MTT用來檢測細胞因子活性的實驗，但是做過很多檢測細胞毒性和殺傷力的實驗，本人覺得做MTT有以下幾點特別需要注意：1. 加MTT時注意槍頭不能插到孔底，免得損傷細胞，2、倒培液是要倒均勻，用槍吸的時候很容易導致細胞被吸走或者吸不均勻，我們自創(chuàng)了一種辦法是將96孔板倒置在吸水紙上，再將96空斑傾斜幾次，這樣能比較均勻的吸走培液，效果挺不錯。 |
5樓2011-07-25 08:29:48
sdjean521
銅蟲 (小有名氣)
- 應助: 3 (幼兒園)
- 金幣: 118.1
- 帖子: 64
- 在線: 19.2小時
- 蟲號: 2074038
- 注冊: 2012-10-20
- 性別: MM
- 專業(yè): 生物技術(shù)藥物
luolh200411樓2013-03-09 23:10:26
浪人利利
金蟲 (正式寫手)
- BioEPI: 2
- 應助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 1210.8
- 散金: 1128
- 紅花: 2
- 帖子: 602
- 在線: 307.6小時
- 蟲號: 445310
- 注冊: 2007-10-28
- 專業(yè): 代謝性疾病藥物藥理
【答案】應助回帖
luolh2004(金幣+15): 非常感謝，我也有點懷疑是凍存的問題。我的是貼壁細胞，可以把上清去掉，還是謝謝你的回答 2011-07-24 23:54:10
|
1、不過期最好了，雙抗過期不很久也沒關(guān)系，培養(yǎng)基最好不要用過期的 2、通過你的描述，個人覺得你凍存的細胞可能都有問題（或者中間液氮干掉了，沒及時補充） 3、沒怎么理解你的意思 個人建議：細胞重新復蘇，培養(yǎng)液重新制取，稍微比平時多加一點血清試試；細胞有碎片或者死細胞就及時PBS多洗幾次，勤換培養(yǎng)液；雖然你的意思我沒完全明白，但是MTT法測定時，96孔板我一般都不把培養(yǎng)液倒掉（防止懸浮細胞倒掉了），直接加MTT、DMSO等處理，然后震蕩后直接測定數(shù)值；以上僅供參考  |
2樓2011-07-23 23:32:10
lw582482481
銅蟲 (初入文壇)
- BioEPI: 2
- 應助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 149.9
- 紅花: 3
- 帖子: 17
- 在線: 5.7小時
- 蟲號: 1297263
- 注冊: 2011-05-16
- 專業(yè): 動物遺傳學
【答案】應助回帖
luolh2004(金幣+20): 謝謝你的回答，對我挺有用處的，建議也很好。 2011-07-24 23:56:12
|
1 雙抗過期是沒有問題的。低溫保存適當?shù)那闆r下沒有差別。培養(yǎng)基過期的話，如果你買的是液體培養(yǎng)基，建議不要用了。如果是固體粉末自己配培養(yǎng)基，沒有多大問題。 2 復蘇之后死細胞過多，這個是你的細胞狀態(tài)不好。也許是你在細胞長的過多的時候傳代，這樣不好（雖然沒有養(yǎng)過你這種細胞）。另外就是可能你細胞在消化的時候受損嚴重，會有部分細胞死亡。而由于你細胞自身長的速度比較快，整體來說不受影響。 3 mtt不知道是啥？但是關(guān)于你的EGH的測定我想，這個蛋白是分泌型的，你在測數(shù)值的時候是否沒有把胞外的那部分沒有測定呢？ 4 關(guān)于你試驗的問題，你的對照以及實驗組是否完全一致，這個十分重要。二者的細胞密度以及生長條件之類的都很有影響。 最后，我建議你是在細胞狀態(tài)調(diào)整好之后再做吧。因為細胞死的多，肯定是有問題的。在細胞生長得最旺盛的時候傳代但是不能過多或者過少。維持2-6d傳一次最好。還有細胞的消化一定要適當。 |
3樓2011-07-24 09:34:26
aegeansyang
銀蟲 (正式寫手)
- 應助: 12 (小學生)
- 金幣: 5517.1
- 散金: 1825
- 紅花: 5
- 帖子: 856
- 在線: 724.4小時
- 蟲號: 243919
- 注冊: 2006-04-16
- 性別: GG
- 專業(yè): 組織工程學
4樓2011-07-24 15:05:09
xiaoxiangtu
金蟲 (小有名氣)
- 應助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 816.8
- 散金: 16
- 帖子: 184
- 在線: 41.2小時
- 蟲號: 1145535
- 注冊: 2010-11-13
- 專業(yè): 生物化學
6樓2011-07-25 09:12:52
7樓2011-07-25 20:59:13
terry130
木蟲 (正式寫手)
- BioEPI: 4
- 應助: 0 (幼兒園)
- 貴賓: 0.001
- 金幣: 2283.9
- 散金: 19
- 紅花: 9
- 帖子: 388
- 在線: 39.3小時
- 蟲號: 313316
- 注冊: 2007-02-24
- 性別: GG
- 專業(yè): 細胞死亡
【答案】應助回帖
luolh2004(金幣+15): 謝謝交流回帖，我覺得你們的意見都很好，可能是我描述太簡單了，等有機會再做個詳細描述吧 2011-07-30 10:54:13
|
1 雙抗過期也沒事的，medium過期的就別用了 2 就算再好的凍存條件，剛復蘇的第一代細胞也必然有很多死的，第二代時也會殘留一些。多傳幾代就好了。只要活細胞生長速度沒影響就沒大問題，忍受不了的話就等狀態(tài)好了之后再重新凍存一批好了。 3 MTT的手技要求很高的，個人感覺是一個重復性較差的實驗方法。你必須保證用于實驗的各組細胞和各批次細胞盡量處于同一的狀態(tài)。比如都是從stock中用同樣方式復蘇同樣代數(shù)的細胞。而且MTT的幾次換液操作也要盡量統(tǒng)一，盡量快，最好是用排槍。MTT時盡量不要用整塊96孔板，用中央的25個左右效果最好。這樣才能盡可能的保證重復性。至于對照組和處理組之間的差別，只要重復性能夠?qū)崿F(xiàn)，你就應該尊重實驗事實，去找可能的原因。 |
8樓2011-07-26 10:11:03
terry130
木蟲 (正式寫手)
- BioEPI: 4
- 應助: 0 (幼兒園)
- 貴賓: 0.001
- 金幣: 2283.9
- 散金: 19
- 紅花: 9
- 帖子: 388
- 在線: 39.3小時
- 蟲號: 313316
- 注冊: 2007-02-24
- 性別: GG
- 專業(yè): 細胞死亡
9樓2011-07-26 10:12:30
kechong
木蟲 (正式寫手)
- 應助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 5268.3
- 散金: 1070
- 紅花: 5
- 帖子: 369
- 在線: 587.2小時
- 蟲號: 607863
- 注冊: 2008-09-20
- 性別: GG
- 專業(yè): 免疫生物學
10樓2012-03-21 14:11:41
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 luolh2004 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 303求調(diào)劑 +3 | 睿08 2026-03-17 | 5/250 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 材料工程專碩調(diào)劑 +5 | 204818@lcx 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 工科材料085601 279求調(diào)劑 +3 | 困于星晨 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[碩博家園] 深圳大學碩士招生（2026秋，傳感器方向，僅錄取第一志愿） +4 | xujiaoszu 2026-03-11 | 9/450 |
|
|
|
[考研] [導師推薦]西南科技大學國防/材料導師推薦 +3 | 尖角小荷 2026-03-16 | 6/300 |
|
|
|
[基金申請] 國自科面上基金字體 +6 | iwuli 2026-03-12 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 286求調(diào)劑 +3 | lemonzzn 2026-03-16 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 機械專碩325，尋找調(diào)劑院校 +3 | y9999 2026-03-15 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0703化學調(diào)劑，求各位老師收留 +8 | 秋有木北 2026-03-14 | 8/400 |
|
|
|
[教師之家] 焦慮 +7 | 水冰月月野兔 2026-03-13 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 本科南京大學一志愿川大藥學327 +3 | 麥田耕者 2026-03-14 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 266求調(diào)劑 +4 | 學員97LZgn 2026-03-13 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 337一志愿華南理工0805材料求調(diào)劑 +7 | mysdl 2026-03-11 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 0703，333分求調(diào)劑 一志愿鄭州大學-物理化學 +3 | 李魔女斗篷 2026-03-11 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 308求調(diào)劑 +5 | 是Lupa啊 2026-03-11 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 26調(diào)劑/材料/英一數(shù)二/總分289/已過A區(qū)線 +6 | 步川酷紫123 2026-03-13 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 281求調(diào)劑 +9 | Koxui 2026-03-12 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 0703化學求調(diào)劑 +7 | 綠豆芹菜湯 2026-03-12 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿211化學學碩310分求調(diào)劑 +8 | 努力奮斗112 2026-03-12 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工 309分請求調(diào)劑 +7 | dtdxzxx 2026-03-12 | 8/400 |
|