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1289622木蟲 (正式寫手)
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[求助]
有誰養(yǎng)過4T1細胞，請教培養(yǎng)方法�。。〖保�！
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我最近買的的4T1細胞（小鼠乳腺癌細胞），生長情況很不好，在消化傳代后，細胞瓶中細胞分散不均勻，長的一堆堆的。 而且用胰酶消化細胞時，細胞變圓不明顯，反而有大片的細胞脫落，還有些細胞吹打不掉。 漂浮的細胞特別多，生長情況很不好。為什么會出現(xiàn)這種情況？怎么解決。 有誰養(yǎng)過這種細胞嗎？培養(yǎng)此種細胞過程中需要什么特別注意的嗎？有什么操作要注意的嗎？還有培養(yǎng)液，胎牛血清，胰酶等有特別要求的嗎？我用的胰酶是加EDTA的，消化的程度老是掌握不好，有影響嗎？請不吝賜教，不勝感激！ [ Last edited by 1289622 on 2011-4-19 at 18:29 ] |
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【答案】應(yīng)助回帖
1289622(金幣+10, 博學EPI+1): 2011-06-28 09:21:29
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Protocol: NOTE: the cells should not be allowed to become confluent, subculture at 80% of confluence. Remove medium, and rinse with 0.25% trypsin-0.53mM EDTA solution. Remove the solution and add an additional 1 to 2 ml of trypsin-EDTA solution. Allow the flask to sit at room temperature (or at 37.0°C) until the cells detach. Add fresh culture medium, aspirate and dispense into new culture flasks. Subcultivation Ratio: A subcultivation ratio of 1:6 to 1:8 is recommended Medium Renewal: Every 2 to 3 days 本段摘自ATCC的4T1細胞說明，一個是不能讓它聚團，一個是要用胰酶洗一次以后再消化，有的細胞洗一次之后消化效果就會好很多。 |
2樓2011-04-20 14:07:15
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