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1289622木蟲 (正式寫手)
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[求助]
有誰養(yǎng)過4T1細(xì)胞,請教培養(yǎng)方法!!急!
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我最近買的的4T1細(xì)胞(小鼠乳腺癌細(xì)胞),生長情況很不好,在消化傳代后,細(xì)胞瓶中細(xì)胞分散不均勻,長的一堆堆的。 而且用胰酶消化細(xì)胞時,細(xì)胞變圓不明顯,反而有大片的細(xì)胞脫落,還有些細(xì)胞吹打不掉。 漂浮的細(xì)胞特別多,生長情況很不好。為什么會出現(xiàn)這種情況?怎么解決。 有誰養(yǎng)過這種細(xì)胞嗎?培養(yǎng)此種細(xì)胞過程中需要什么特別注意的嗎?有什么操作要注意的嗎?還有培養(yǎng)液,胎牛血清,胰酶等有特別要求的嗎?我用的胰酶是加EDTA的,消化的程度老是掌握不好,有影響嗎?請不吝賜教,不勝感激! [ Last edited by 1289622 on 2011-4-19 at 18:29 ] |
金蟲 (正式寫手)
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Protocol: NOTE: the cells should not be allowed to become confluent, subculture at 80% of confluence. Remove medium, and rinse with 0.25% trypsin-0.53mM EDTA solution. Remove the solution and add an additional 1 to 2 ml of trypsin-EDTA solution. Allow the flask to sit at room temperature (or at 37.0°C) until the cells detach. Add fresh culture medium, aspirate and dispense into new culture flasks. Subcultivation Ratio: A subcultivation ratio of 1:6 to 1:8 is recommended Medium Renewal: Every 2 to 3 days 本段摘自ATCC的4T1細(xì)胞說明,一個是不能讓它聚團,一個是要用胰酶洗一次以后再消化,有的細(xì)胞洗一次之后消化效果就會好很多。 |
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