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happyxiaoli銅蟲(chóng) (小有名氣)
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大鼠氣管上皮細(xì)胞培養(yǎng)方法 已有1人參與
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我最近做大鼠氣管上皮細(xì)胞原代培養(yǎng)，用酶消化法，用了好幾種沒(méi)消化，得到的細(xì)胞數(shù)都特別少。 我的方法是：取大鼠2只，麻醉后，在無(wú)菌條件下取氣管，用冷的PBS液沖洗，分離除去其他粘膜組織，再用PBS（含青-鏈雙抗）液沖洗3遍，結(jié)扎一端，灌入0.25%胰酶，結(jié)扎另一端，4度，冰箱過(guò)夜。剪開(kāi)結(jié)扎線，加入10%的小牛血清的DMEM培養(yǎng)液終止消化。將液體轉(zhuǎn)移置于10ml離心管中，1000r/min,10min.培養(yǎng)液沖洗重復(fù)一次，加培養(yǎng)液吹達(dá)成細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)，發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞的數(shù)量特別少。做了好幾次都是一樣的結(jié)果，我還試了0.25%中性蛋白酶，結(jié)果差不多。 現(xiàn)在找不出原因，請(qǐng)師哥師姐，朋友們幫幫忙，幫我分析一下，非常感謝�。�！急！急！急！ |
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2樓2011-11-10 08:43:47
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4樓2011-11-10 13:50:13
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5樓2011-11-11 23:24:38
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【答案】應(yīng)助回帖
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wanhscn(MolEPI+1): 2011-11-12 10:09:33
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我做的是關(guān)節(jié)滑膜細(xì)胞，我看你寫(xiě)的方法，好像在消化的整個(gè)過(guò)程中沒(méi)有進(jìn)行吹打，每10分鐘左右對(duì)其吹打一次，效果應(yīng)該會(huì)好點(diǎn)。消化完成后，我先先在顯微鏡下觀察，會(huì)有較多細(xì)胞，但離心后，也出現(xiàn)減少，所以我不建議離心，直接將所有東西轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶培養(yǎng)。4度情況下，胰酶幾乎沒(méi)有活力，過(guò)夜來(lái)說(shuō)，也沒(méi)多少細(xì)胞，文獻(xiàn)上的很多都是“牛人”，他們的實(shí)驗(yàn)要重復(fù)出來(lái)很難，僅供參考 [ 發(fā)自手機(jī)版 http://www.gaoyang168.com/3g ] |
6樓2011-11-12 03:59:34
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7樓2011-11-13 21:59:42
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8樓2011-11-21 10:18:38
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9樓2012-08-29 21:44:20
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10樓2014-07-22 12:19:08
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