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happyxiaoli銅蟲(chóng) (小有名氣)
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大鼠氣管上皮細(xì)胞培養(yǎng)方法 已有1人參與
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我最近做大鼠氣管上皮細(xì)胞原代培養(yǎng),用酶消化法,用了好幾種沒(méi)消化,得到的細(xì)胞數(shù)都特別少。 我的方法是:取大鼠2只,麻醉后,在無(wú)菌條件下取氣管,用冷的PBS液沖洗,分離除去其他粘膜組織,再用PBS(含青-鏈雙抗)液沖洗3遍,結(jié)扎一端,灌入0.25%胰酶,結(jié)扎另一端,4度,冰箱過(guò)夜。剪開(kāi)結(jié)扎線,加入10%的小牛血清的DMEM培養(yǎng)液終止消化。將液體轉(zhuǎn)移置于10ml離心管中,1000r/min,10min.培養(yǎng)液沖洗重復(fù)一次,加培養(yǎng)液吹達(dá)成細(xì)胞懸液,計(jì)數(shù),發(fā)現(xiàn),細(xì)胞的數(shù)量特別少。做了好幾次都是一樣的結(jié)果,我還試了0.25%中性蛋白酶,結(jié)果差不多。 現(xiàn)在找不出原因,請(qǐng)師哥師姐,朋友們幫幫忙,幫我分析一下,非常感謝!!急!急!急! |

鐵桿木蟲(chóng) (小有名氣)
銅蟲(chóng) (小有名氣)

銅蟲(chóng) (小有名氣)

銅蟲(chóng) (小有名氣)

鐵桿木蟲(chóng) (小有名氣)
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我做的是關(guān)節(jié)滑膜細(xì)胞,我看你寫(xiě)的方法,好像在消化的整個(gè)過(guò)程中沒(méi)有進(jìn)行吹打,每10分鐘左右對(duì)其吹打一次,效果應(yīng)該會(huì)好點(diǎn)。消化完成后,我先先在顯微鏡下觀察,會(huì)有較多細(xì)胞,但離心后,也出現(xiàn)減少,所以我不建議離心,直接將所有東西轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶培養(yǎng)。4度情況下,胰酶幾乎沒(méi)有活力,過(guò)夜來(lái)說(shuō),也沒(méi)多少細(xì)胞,文獻(xiàn)上的很多都是“牛人”,他們的實(shí)驗(yàn)要重復(fù)出來(lái)很難,僅供參考 [ 發(fā)自手機(jī)版 http://www.gaoyang168.com/3g ] |
銅蟲(chóng) (小有名氣)

銅蟲(chóng) (小有名氣)

鐵蟲(chóng) (初入文壇)
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