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chzhbin金蟲 (職業(yè)作家)
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Determination of ACD. Caspase activity was measured using the Apo-ONE homogeneous Caspase-3/7-assay (Promega) according to the manufacturers protocol. Briefly, 50 000 cells/well were plated in 96-multiwell dishes, allowed to attach for 24 h, and treated with isolated compounds for 24 h. Then 50 µL of Apo-ONE Caspase-3/7-reagent was added, and the increase in fluorescence was measured for3hat 37 °C using a Perkin-Elmer Wallac VICTOR 1420 multilabel counter (excitation: 485 nm, emission: 535 nm). To investigate nuclear fragmentation as a further feature of apoptotic cell death, cells were grown in 35 mm cell culture dishes for 48 h and then incubated with different concentrations of the flavonoid compounds for 24 h. Then, without medium change, nuclei were stained with 100 µmol/L Hoechst 33342 for 15 min and sealed with a glass coverslip. Cells with condensed and fragmented nuclei were photographed at 400-fold magnification using a Zeiss Axiolab fluorescence microscope (excitation: 365 nm, emission: 420 nm). |
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chzhbin(金幣+30):呵呵 是老師留的作業(yè) 做期末考評(píng)的 哈哈 我也是給別人翻譯的 感謝 2010-12-25 17:41:16
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凋亡檢測(cè)。Caspase活性使用Apo-ONE Caspase-3/7-assay (Promega)試劑盒檢測(cè)，根據(jù)說(shuō)明書操作。簡(jiǎn)言之，于96孔板中每孔種50000個(gè)細(xì)胞，貼壁24h，后用分離的化合物孵育24h。隨后，加入50xxx（看不清單位）的Apo-ONE Caspase-3/7試劑，在37℃中用Perkin-Elmer Wallac VICTOR 1420多標(biāo)記分析儀（激發(fā)波長(zhǎng)：485nm，發(fā)射波長(zhǎng)：535nm）測(cè)定3h內(nèi)熒光值的動(dòng)態(tài)增長(zhǎng)。 針對(duì)細(xì)胞凋亡中核碎裂的研究，首先將35mm皿中的細(xì)胞培養(yǎng)48h，后用不同濃度的類黃酮化合物孵育24h。隨后在不換液的條件下，用xxx（數(shù)量和單位）的Hoechst 33342染細(xì)胞核15min，后封上蓋玻片。用Zeiss Axiolab熒光顯微鏡 (激發(fā)波長(zhǎng): 365 nm, 發(fā)射波長(zhǎng): 420 nm)放大400倍拍攝帶有固縮和碎裂核的細(xì)胞。 校友的份上……  |
7樓2010-12-25 17:36:51
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9樓2010-12-25 18:38:50
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10樓2010-12-26 08:44:20
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2010-12-26 08:58
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