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[交流]
【求助/交流】SDS-PAGE凝膠電泳膠的詳細(xì)制備方法
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| SDS-PAGE凝膠電泳膠的詳細(xì)制備方法 |
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木蟲之王 (文壇精英)
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個(gè)人覺得那本書有點(diǎn)兒老了,過時(shí)了 以下是我個(gè)人查資料得出的,也是自己做實(shí)驗(yàn)要用的?梢詤⒖家幌,不過我覺得你還是要多查文獻(xiàn),與你要做內(nèi)容相關(guān)的文獻(xiàn),還是很有用的。 (1) 30%丙烯酰胺(Acr)溶液:稱Acr 30g,甲叉雙丙烯酰胺(Bis)0.8g,加純水至100mL 4℃棕色瓶保存(1-2個(gè)月) (2) 10%十二烷基硫酸鈉(SDS)溶液:稱SDS 10g,加純水至100mL,室溫保存 (3) 10%過硫酸銨(AP)溶液:稱AP 1g,加純水至10mL,-20℃保存 (4) 1.5mol/L pH8.8 Tris-HCl緩沖液:稱取Tris 181.71g,加入800mL水,用1mol/L鹽酸調(diào)pH8.8, 最后定容至1L (5) 0.5mol/L pH6.8 Tris-HCl緩沖液:稱取Tris12.1g,加入150mL水,用1mol/L鹽酸調(diào)pH6.8, 最后用蒸餾水定容至200mL (6) 1.0mol/L pH6.8 Tris-HCl緩沖液:稱取Tris12.1g,加入50mL水,用1mol/L鹽酸調(diào)pH6.8, 最后用蒸餾水定容至100mL。 (7) TEMED:N,N,N',N'-四甲基乙二胺; DTT:二硫蘇糖醇(DTT和巰基乙醇相比,作用相似,但DTT的刺激性氣味要小很多,毒性也比巰基乙醇低很多。而且DTT比巰基乙醇的濃度低7倍時(shí),兩者效果相近,但DTT價(jià)格略高一些。由于容易被空氣氧化,因此DTT的穩(wěn)定性較差;但冷凍保存或在惰性氣體中處理能夠延長它的使用壽命) (8) 12%變性聚丙烯酰胺凝膠溶液:現(xiàn)用現(xiàn)配 試劑組成 100mL 30%丙烯酰胺(mL) 40 Tris-HCL 1.5M pH8.8(mL) 25 10% SDS(mL) 1 超純水(mL) 33 TEMED(μL) 40 10%過硫酸銨(mL) 1 (9) 4%變性聚丙烯酰胺凝膠溶液:現(xiàn)用現(xiàn)配 試劑組成 5mL 30%丙烯酰胺(mL) 0.67 Tris-HCL 0.5M pH6.8(mL) 0.63 10% SDS(mL) 0.05 超純水(mL) 3.6 TEMED(μL) 5 10%過硫酸銨(mL) 0.05 (10) 5*上樣緩沖液:4℃保存 試劑組成 10mL Tris-HCL 1.0M pH6.8(mL) 2.5 甘油(mL) 5 SDS(g) 1 超純水(mL) 溴酚藍(lán) 痕量 (10)10*電極緩沖液: 試劑組成 1L 甘氨酸(g) 2.5 Tris(g) 5 SDS(g) 1 超純水(mL) 室溫保存,使用時(shí)取100 mL,另加10 mL 10% SDS定容至1L,可重復(fù)用3-5次 |
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