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【求助】UPLC檢測對(duì)苯二酚
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用WATERS公司的UPLC檢測對(duì)苯二酚結(jié)果發(fā)現(xiàn)不保留，幾個(gè)問題需要請(qǐng)教下大家： 我選用的條件是：色譜柱：BEH C18 ，2.1×50mm，1.7um； 流動(dòng)相：甲醇：1%乙酸水溶液=5：95 流速：0.1ml/min;0.25ml/min 國標(biāo)選用的方法是常規(guī)的C18柱，4.6×250mm，5um 流動(dòng)相：甲醇：1%乙酸水溶液=5：95 流速：0.8ml/min 保留時(shí)間基本控制在6～7min 1. 0.25ml/min下的保留時(shí)間在0.5min；0.1ml/min下的保留時(shí)間約1.2min；以0.1ml/min會(huì)不會(huì)有點(diǎn)太低，影響檢測的準(zhǔn)確性； 2. 如果繼續(xù)增大乙酸在水溶液中的含量最大可以到多少？ 3.如果不換柱子還有什么還辦法能夠讓保留時(shí)間延長？ 多謝！ |
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wangly(金幣+10):非常感謝！ 2011-01-11 09:51:07
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0.1的流速太慢了，UPLC的最佳流速在0.25~0.35之間，你用的是紫外檢測器吧，注意下壓力，不高的話可以用大點(diǎn)的流速，峰形會(huì)漂亮 可以適當(dāng)提高甲醇的比例，摸條件時(shí)，可以先運(yùn)行一個(gè)梯度方法，看看待測物質(zhì)大致在哪個(gè)甲醇比例下出峰，再選用此比例的等度條件做，等度條件重現(xiàn)性好些 長柱子與短柱子在方法上是有一定區(qū)別的， 醋酸銨的濃度與柱子有關(guān)，具體能加到多少濃度也不好說，我用過的最高濃度是30mmol，你這個(gè)濃度貌似有點(diǎn)高，短柱子填料小，容易堵，10mmol就能夠起到改善分離度和峰形的作用了 |
2樓2011-01-06 15:50:28
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