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tongxinkxy銀蟲 (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】酵母表達(dá)和原核表達(dá)，在技術(shù)上有什么不同？ 已有5人參與
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是否也可以用氯化鈣法制作感受態(tài)？ 是否可以和大腸桿菌一樣的搖床培養(yǎng)條件？ 除培養(yǎng)基不同外，還有什么不同啊 請指教 |
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tongxinkxy
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3樓2011-01-01 13:47:35
susizheng
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amisking(金幣+2): 2011-01-01 16:50:50
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amisking(金幣+2): 2011-01-01 16:50:50
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酵母表達(dá)，與原核表達(dá)，操作上的區(qū)別在于：表達(dá)載體構(gòu)建好后，有一個(gè)線性化表達(dá)載體并整合進(jìn)酵母染色體的過程。（當(dāng)然釀酒酵母液有負(fù)載型表達(dá)載體，不需要整合） 培養(yǎng)條件上與大腸桿菌相比，溫度最適時(shí)30℃，而大腸是37℃。另外酵母對氧氣的需求也比大腸高，因此搖床轉(zhuǎn)速一般設(shè)置為200-250 rpm，而大腸我們通常只需要150 rpm就夠了。 由于酵母細(xì)胞壁較厚，因此普通化學(xué)轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)化率太低，因此酵母一般采用電轉(zhuǎn)的方法。由于電轉(zhuǎn)是，鹽離子濃度不能太高（否則有爆杯的可能），因此感受態(tài)一般采用山梨醇制備，不用氯化鈣。 |
2樓2011-01-01 13:42:23
susizheng
木蟲 (著名寫手)
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4樓2011-01-01 14:08:35
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5樓2011-01-01 18:26:31
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