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北京石油化工學(xué)院2026年研究生招生接收調(diào)劑公告
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2207993

金蟲 (小有名氣)


[交流] 【求助/交流】PCR結(jié)果突然和以前不同

PCR電泳圖,條帶不集中,彌散很嚴(yán)重,是什么原因呢
電泳緩沖液TAE,新配的
以前的條件、體系都沒變,跑不出原來的效果了
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lpfxmc

木蟲 (初入文壇)



2207993(金幣+1): 2011-01-04 11:12:51
1949stone(金幣+1):謝謝交流 2011-01-04 22:28:29
最好附張照片看看。
可以考慮是不是模板放置的時間過長,或者你是否前后用的模板不一致?
2樓2011-01-04 11:02:21
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lpfxmc

木蟲 (初入文壇)


★ ★
dhd997(金幣+2):謝謝交流 2011-01-04 12:23:36
2207993(金幣+1): 2011-01-04 19:13:45
加樣孔中怎么滯留了那么多的樣品?確定電泳沒有問題?
多做兩次PCR,若結(jié)果還是這樣,則考慮是不是模板放置的時間過長(降解了等等問題)?
3樓2011-01-04 11:06:33
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2207993

金蟲 (小有名氣)


做了四五次了,DNA樣品重新提取制備了,結(jié)果還是這樣
4樓2011-01-04 11:13:48
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不是馬甲3

木蟲 (初入文壇)


2207993(金幣+1): 2011-01-04 19:13:52
MARKER都沒跑好,是不是膠的問題?
5樓2011-01-04 11:19:58
已閱   回復(fù)此樓   關(guān)注TA 給TA發(fā)消息 送TA紅花 TA的回帖

紫柳瀟瀟

金蟲 (小有名氣)


2207993(金幣+1): 2011-01-04 19:13:58
你的膠是不是有問題啊
6樓2011-01-04 11:39:44
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doukezhiwu

木蟲 (著名寫手)


★ ★
dhd997(金幣+2):謝謝交流 2011-01-04 12:23:54
2207993(金幣+1): 2011-01-04 19:14:34
提取的DNA不純,點(diǎn)樣孔里的白色殘留可能是蛋白酶沒有溶解的蛋白;再就是配制的電泳液或緩沖液可能不是用ddH2O配制的,是否用蒸餾水配制的;還有PCR儀也許不穩(wěn)定或者和上次用的不是一個機(jī)子。
7樓2011-01-04 11:44:49
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引用回帖:
Originally posted by 2207993 at 2011-01-04 11:13:48:
做了四五次了,DNA樣品重新提取制備了,結(jié)果還是這樣

有可能是污染了。 把所有東西都滅菌試試。 另, 詳細(xì)檢查TAE
8樓2011-01-04 12:43:25
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tianhuijuan

金蟲 (小有名氣)


引用回帖:
Originally posted by lpfxmc at 2011-01-04 11:02:21:
最好附張照片看看。
可以考慮是不是模板放置的時間過長,或者你是否前后用的模板不一致?

請問一下,模板一般最多可以放置多長時間?
多謝!
9樓2011-01-04 13:50:07
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tianhuijuan

金蟲 (小有名氣)


引用回帖:
Originally posted by lpfxmc at 2011-01-04 11:06:33:
加樣孔中怎么滯留了那么多的樣品?確定電泳沒有問題?
多做兩次PCR,若結(jié)果還是這樣,則考慮是不是模板放置的時間過長(降解了等等問題)?

請問一下,模板一般最多可以放置多長時間?
多謝!
10樓2011-01-04 13:50:38
已閱   回復(fù)此樓   關(guān)注TA 給TA發(fā)消息 送TA紅花 TA的回帖
重新配膠,體系稍微變一下,看看效果如何?
11樓2011-01-04 14:58:04
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引用回帖:
Originally posted by tianhuijuan at 2011-01-04 13:50:38:

請問一下,模板一般最多可以放置多長時間?
多謝!

提的DNA模板在-20可以放很久的
12樓2011-01-04 15:59:56
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lpfxmc

木蟲 (初入文壇)


一般情況下,DNA模板放置四度或者常溫數(shù)月問題都不大,要是更低溫度保存可放置更長時間的。不過有可能你在做pcr過程,造成了模板的損傷或者污染。
我們實(shí)驗(yàn)室前段時間也遇到了和你一樣的情況,我們后來就發(fā)現(xiàn)主要是DNA模板出問題了。后來重新更換了DNA模板,就出來了很漂亮的條帶。
13樓2011-01-04 19:54:47
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lpfxmc

木蟲 (初入文壇)


一般情況下,DNA模板放置四度或者常溫數(shù)月問題都不大,要是更低溫度保存可放置更長時間的。不過有可能你在做pcr過程,造成了模板的損傷或者污染。
我們實(shí)驗(yàn)室前段時間也遇到了和你一樣的情況,我們后來就發(fā)現(xiàn)主要是DNA模板出問題了。后來重新更換了DNA模板,就出來了很漂亮的條帶。
14樓2011-01-04 19:55:53
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513279618

銀蟲 (小有名氣)


2207993(金幣+1): 2011-01-18 18:20:24
合成新引物看看,應(yīng)該可以p出結(jié)果。還有就是你得膠配的不是很好,按理說應(yīng)該有一段很亮的彌散帶,降低一下循環(huán)數(shù)。
16樓2011-01-05 15:47:34
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wuw579

鐵桿木蟲 (正式寫手)


2207993(金幣+1): 2011-01-18 18:20:17
1.膠沒配好,Marker跑得不好
2.酶的效率不如從前,建議換酶
17樓2011-01-17 21:39:00
已閱   回復(fù)此樓   關(guān)注TA 給TA發(fā)消息 送TA紅花 TA的回帖

ycyqh

新蟲 (初入文壇)


估計是電泳膠的問題

2207993(金幣+1): 2011-01-18 18:20:11
有可能是膠太薄了,以前出現(xiàn)過類似問題。要么是膠凝固不均勻也有類似現(xiàn)象出現(xiàn)。
18樓2011-01-17 22:44:36
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QIAO4984

銅蟲 (小有名氣)


2207993(金幣+1): 2011-01-18 18:20:02
不是   

一看那條歪歪的帶   我就知道是怎么回事


是緩沖液的問題   配的緩沖液濃度不對   或者  緩沖液和膠的濃度不對



總之是緩沖液沒配好
19樓2011-01-17 23:30:45
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QIAO4984

銅蟲 (小有名氣)


2207993(金幣+1): 2011-01-18 18:19:56
去別的實(shí)驗(yàn)室換個槽子 換個TAE試試  


如果還不行   說明是PCR的問題
20樓2011-01-17 23:31:43
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簡單回復(fù)
2011-01-05 12:27   回復(fù)  
引用回帖:
Originally posted by rainwander at 2011-01-04 15:59:56: 提的DNA模板在-20可以放很久的

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