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baby1_9253344

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[交流] 【求助/交流】求助平板抑菌試驗(yàn)的技術(shù)問(wèn)題

如題，最近在做一個(gè)抑菌試驗(yàn)，需要驗(yàn)證一種固體片狀材料的抗菌性能，由于不是粉末或者可溶物質(zhì)，采用什么試驗(yàn)手段成為我的一個(gè)小難題。通過(guò)文獻(xiàn)查閱，確定的試驗(yàn)方案是：
因?yàn)槭穷A(yù)實(shí)驗(yàn)，所以采用的固體材料都是不抗菌的，想要先試試方案是否可行
方案1，將固體材料放置于平板的固體培養(yǎng)基上，滴菌液（大腸桿菌），涂開(kāi)，之后再分別滴0.5%瓊脂的半固體培養(yǎng)基，0.25%瓊脂的半固體培養(yǎng)基及液體培養(yǎng)基；

方案2，預(yù)先制備厚度約3mm的瓊脂培養(yǎng)基。將固體材料消毒之后平放在培養(yǎng)皿內(nèi)，滴菌液，涂開(kāi)，之后從預(yù)先制備的瓊脂培養(yǎng)基薄層切開(kāi)適當(dāng)大小，蓋在菌液上；（之所以這樣是因?yàn)槿绻枪腆w培養(yǎng)基滴在菌液上，培養(yǎng)基太粘稠，而且極易凝固）

以上兩種方案之后，將培養(yǎng)皿（蓋子在上面，非倒放）37度培養(yǎng)12-16小時(shí)。

結(jié)果第二天一看，按照方案一培養(yǎng)的，材料上看不到明顯的菌斑，而材料周圍的固體培養(yǎng)基上卻有大量菌斑。仔細(xì)想來(lái)，應(yīng)該是因?yàn)樯w子在上，水分冷凝后可能滴到了材料上，沖散了滴液體培養(yǎng)基的菌液。但材料上半固體培養(yǎng)基里面為什么不長(zhǎng)細(xì)菌呢，是時(shí)間不夠長(zhǎng)嗎？
方案二，預(yù)先做好的瓊脂培養(yǎng)基薄層，做了不同菌液濃度的，發(fā)現(xiàn)小濃度的有依稀的菌落生成，但是大濃度（10~5和10~7）卻沒(méi)有菌落和菌斑，實(shí)在是搞不懂。

啰嗦這么多，想要請(qǐng)有經(jīng)驗(yàn)的蟲(chóng)子們教教我，我這抑菌試驗(yàn)到底該怎么做啊~~~~頭大。。。。

（文獻(xiàn)上講，滴瓊脂培養(yǎng)基時(shí)候，要點(diǎn)是溫度，不能太高，否則細(xì)菌會(huì)燙死，也不能太低，要不就凝固了，這些我也都考慮到了，實(shí)在是。。。。不知道該怎么辦）

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1樓 2011-01-10 10:12:09

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baby1_9253344

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引用回帖:

Originally posted by puma2003 at 2011-01-10 10:55:43:
培養(yǎng)基融化后待冷卻后將菌液混入其中，倒板，凝固后放入材料，培養(yǎng)待測(cè)

如果這樣操作，出來(lái)的效果是材料下方的固體培養(yǎng)基里不會(huì)有菌斑嗎？
還有一個(gè)小小疑問(wèn)，菌液混合在固體和半固體培養(yǎng)基中生長(zhǎng)出的菌斑好像很小啊，這樣拍照片出不來(lái)效果，是不是延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間可以讓菌斑長(zhǎng)大呢

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4樓2011-01-10 11:03:04

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puma2003

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baby1_9253344(金幣+1):3Q 2011-01-10 10:59:45
rainwander(金幣+1):鼓勵(lì)積極參與交流~~~ 2011-01-10 12:07:24

培養(yǎng)基融化后待冷卻后將菌液混入其中，倒板，凝固后放入材料，培養(yǎng)待測(cè)

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2樓2011-01-10 10:55:43

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srlee

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baby1_9253344(金幣+1):謝謝表?yè)P(yáng)，哈哈 2011-01-10 11:03:45
rainwander(金幣+1):鼓勵(lì)積極參與交流~~~ 2011-01-10 12:07:33

看完了，首先很欣賞你準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)方案的過(guò)程，但是你的具體操作我沒(méi)有看的太明白，估計(jì)用的是混菌法或雙層瓊脂法吧！我覺(jué)得如果是“固體片狀材料”，可不可以利用像濾紙片法一樣來(lái)做抑菌試驗(yàn)?zāi)�，你可以試試！祝�?shí)驗(yàn)順利！

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3樓2011-01-10 11:00:19

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引用回帖:

Originally posted by srlee at 2011-01-10 11:00:19:
看完了，首先很欣賞你準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)方案的過(guò)程，但是你的具體操作我沒(méi)有看的太明白，估計(jì)用的是混菌法或雙層瓊脂法吧！我覺(jué)得如果是“固體片狀材料”，可不可以利用像濾紙片法一樣來(lái)做抑菌試驗(yàn)?zāi)�，你可以試試！祝�?shí)驗(yàn)順 ...

怪我表述的啰嗦了，因?yàn)椴皇菍W(xué)生物的，不太專業(yè)，我的這個(gè)土方法貌似就是你說(shuō)的雙層瓊脂法了，呵呵。我發(fā)覺(jué)好像把細(xì)菌包在瓊脂里面長(zhǎng)的比較慢，或者是因?yàn)橄拗茢U(kuò)散了，長(zhǎng)的菌落比較�。恳�?yàn)橄胍志头且志膶?duì)比照片，所以想要大一點(diǎn)的菌落，那我是應(yīng)該增加菌液密度還是應(yīng)該延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間呢？

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5樓2011-01-10 11:09:25

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