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baby1_9253344

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[交流] 【求助/交流】求助平板抑菌試驗(yàn)的技術(shù)問題

如題，最近在做一個(gè)抑菌試驗(yàn)，需要驗(yàn)證一種固體片狀材料的抗菌性能，由于不是粉末或者可溶物質(zhì)，采用什么試驗(yàn)手段成為我的一個(gè)小難題。通過文獻(xiàn)查閱，確定的試驗(yàn)方案是：
因?yàn)槭穷A(yù)實(shí)驗(yàn)，所以采用的固體材料都是不抗菌的，想要先試試方案是否可行
方案1，將固體材料放置于平板的固體培養(yǎng)基上，滴菌液（大腸桿菌），涂開，之后再分別滴0.5%瓊脂的半固體培養(yǎng)基，0.25%瓊脂的半固體培養(yǎng)基及液體培養(yǎng)基；

方案2，預(yù)先制備厚度約3mm的瓊脂培養(yǎng)基。將固體材料消毒之后平放在培養(yǎng)皿內(nèi)，滴菌液，涂開，之后從預(yù)先制備的瓊脂培養(yǎng)基薄層切開適當(dāng)大小，蓋在菌液上；（之所以這樣是因?yàn)槿绻枪腆w培養(yǎng)基滴在菌液上，培養(yǎng)基太粘稠，而且極易凝固）

以上兩種方案之后，將培養(yǎng)皿（蓋子在上面，非倒放）37度培養(yǎng)12-16小時(shí)。

結(jié)果第二天一看，按照方案一培養(yǎng)的，材料上看不到明顯的菌斑，而材料周圍的固體培養(yǎng)基上卻有大量菌斑。仔細(xì)想來(lái)，應(yīng)該是因?yàn)樯w子在上，水分冷凝后可能滴到了材料上，沖散了滴液體培養(yǎng)基的菌液。但材料上半固體培養(yǎng)基里面為什么不長(zhǎng)細(xì)菌呢，是時(shí)間不夠長(zhǎng)嗎？
方案二，預(yù)先做好的瓊脂培養(yǎng)基薄層，做了不同菌液濃度的，發(fā)現(xiàn)小濃度的有依稀的菌落生成，但是大濃度（10~5和10~7）卻沒有菌落和菌斑，實(shí)在是搞不懂。

啰嗦這么多，想要請(qǐng)有經(jīng)驗(yàn)的蟲子們教教我，我這抑菌試驗(yàn)到底該怎么做啊~~~~頭大。。。。

（文獻(xiàn)上講，滴瓊脂培養(yǎng)基時(shí)候，要點(diǎn)是溫度，不能太高，否則細(xì)菌會(huì)燙死，也不能太低，要不就凝固了，這些我也都考慮到了，實(shí)在是。。。。不知道該怎么辦）

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1樓 2011-01-10 10:12:09

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baby1_9253344(金幣+1):3Q 2011-01-10 10:59:45
rainwander(金幣+1):鼓勵(lì)積極參與交流~~~ 2011-01-10 12:07:24

培養(yǎng)基融化后待冷卻后將菌液混入其中，倒板，凝固后放入材料，培養(yǎng)待測(cè)

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2樓2011-01-10 10:55:43

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srlee

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baby1_9253344(金幣+1):謝謝表?yè)P(yáng)，哈哈 2011-01-10 11:03:45
rainwander(金幣+1):鼓勵(lì)積極參與交流~~~ 2011-01-10 12:07:33

看完了，首先很欣賞你準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)方案的過程，但是你的具體操作我沒有看的太明白，估計(jì)用的是混菌法或雙層瓊脂法吧！我覺得如果是“固體片狀材料”，可不可以利用像濾紙片法一樣來(lái)做抑菌試驗(yàn)?zāi)�，你可以試試！祝�?shí)驗(yàn)順利！

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3樓2011-01-10 11:00:19

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Originally posted by puma2003 at 2011-01-10 10:55:43:
培養(yǎng)基融化后待冷卻后將菌液混入其中，倒板，凝固后放入材料，培養(yǎng)待測(cè)

如果這樣操作，出來(lái)的效果是材料下方的固體培養(yǎng)基里不會(huì)有菌斑嗎？
還有一個(gè)小小疑問，菌液混合在固體和半固體培養(yǎng)基中生長(zhǎng)出的菌斑好像很小啊，這樣拍照片出不來(lái)效果，是不是延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間可以讓菌斑長(zhǎng)大呢

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4樓2011-01-10 11:03:04

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Originally posted by srlee at 2011-01-10 11:00:19:
看完了，首先很欣賞你準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)方案的過程，但是你的具體操作我沒有看的太明白，估計(jì)用的是混菌法或雙層瓊脂法吧！我覺得如果是“固體片狀材料”，可不可以利用像濾紙片法一樣來(lái)做抑菌試驗(yàn)?zāi)兀憧梢栽囋�！祝�?shí)驗(yàn)順 ...

怪我表述的啰嗦了，因?yàn)椴皇菍W(xué)生物的，不太專業(yè)，我的這個(gè)土方法貌似就是你說的雙層瓊脂法了，呵呵。我發(fā)覺好像把細(xì)菌包在瓊脂里面長(zhǎng)的比較慢，或者是因?yàn)橄拗茢U(kuò)散了，長(zhǎng)的菌落比較小？因?yàn)橄胍志头且志膶?duì)比照片，所以想要大一點(diǎn)的菌落，那我是應(yīng)該增加菌液密度還是應(yīng)該延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間呢？

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5樓2011-01-10 11:09:25

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天使托

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你們實(shí)驗(yàn)室原來(lái)沒有人做過嗎？

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6樓2011-01-10 11:31:24

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怪我表述的啰嗦了，因?yàn)椴皇菍W(xué)生物的，不太專業(yè)，我的這個(gè)土方法貌似就是你說的雙層瓊脂法了，呵呵。我發(fā)覺好像把細(xì)菌包在瓊脂里面長(zhǎng)的比較慢，或者是因?yàn)橄拗茢U(kuò)散了，長(zhǎng)的菌落比較小？因?yàn)橄胍志头且志?...

呵呵，說來(lái)話長(zhǎng)呀，建議看一下微生物實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)！

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7樓2011-01-10 11:31:33

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Originally posted by 天使托 at 2011-01-10 11:31:24:
你們實(shí)驗(yàn)室原來(lái)沒有人做過嗎？

沒有，從來(lái)也沒有。。。呵呵，要不然我也不能這么無(wú)助啊。。。

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8樓2011-01-10 11:37:43

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Originally posted by baby1_9253344 at 2011-01-10 11:03:04:

如果這樣操作，出來(lái)的效果是材料下方的固體培養(yǎng)基里不會(huì)有菌斑嗎？
還有一個(gè)小小疑問，菌液混合在固體和半固體培養(yǎng)基中生長(zhǎng)出的菌斑好像很小啊，這樣拍照片出不來(lái)效果，是不是延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間可以讓菌斑長(zhǎng)大呢

可以不在培養(yǎng)基中混入菌液，而是將材料放在培養(yǎng)基平板上1-2d，然后再涂板，這樣效果會(huì)不會(huì)好些？

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9樓2011-01-15 16:40:40

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Originally posted by puma2003 at 2011-01-15 16:40:40:

可以不在培養(yǎng)基中混入菌液，而是將材料放在培養(yǎng)基平板上1-2d，然后再涂板，這樣效果會(huì)不會(huì)好些？

這個(gè)我也想過，不過如果這樣，材料上面涂的菌液沒有營(yíng)養(yǎng)源啊

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10樓2011-01-16 11:13:35

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lmy0459

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11樓2012-03-18 20:00:24

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12樓2012-03-18 20:01:22

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lingling安農(nóng)

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★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖

我也做抑菌實(shí)驗(yàn)的，待瓊脂跟在大拇指與食指之間檢測(cè)，這個(gè)部位比較敏感，這時(shí)不燙的話就可以加指示菌了，不會(huì)燙死的

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13樓2013-03-14 14:46:18

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