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[交流] 【求助/交流】立春紅 WB 染色

請(qǐng)教一下

由于樣品沒有合適的loading control，打算用立春紅染色來(lái)做loading control，

但是用PVDF膜，發(fā)現(xiàn)染色效果不佳，無(wú)法用作loading control。

（但用該法在NC膜上染色，效果要好很多）

請(qǐng)問一下：

1 PVDF膜用立春紅染色是不是比 NC膜要差？

2 有沒有適合于PVDF膜的立春紅染色方法？[由于目前預(yù)實(shí)驗(yàn)在PVDf上效果可，故不考慮換做NC膜]

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1樓 2011-01-15 21:19:23

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dhd997(金幣+1):謝謝交流 2011-01-16 09:36:44
scorpioneuro(金幣+1): 3x 2011-01-16 16:29:43

立春紅染色染色靈敏度差，100NG 有些公司，例如上海生工有高靈敏的膜染色方法。

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2樓2011-01-15 21:33:20

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dhd997(金幣+2):經(jīng)驗(yàn)之談啊。 2011-01-16 09:37:03
scorpioneuro(金幣+2): 3x 2011-01-16 16:29:55

我用PVDF膜染得好好的啊~
不過(guò)就算用膜來(lái)染色當(dāng)control，發(fā)文章的時(shí)候人家認(rèn)不認(rèn)的啊……
其實(shí)可以混一個(gè)已知量BSA當(dāng)內(nèi)參的

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3樓2011-01-15 22:15:06

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Originally posted by xhjggl at 2011-01-15 21:33:20:
立春紅染色染色靈敏度差，100NG 有些公司，例如上海生工有高靈敏的膜染色方法。

這個(gè)高靈敏度的染色方法對(duì)后續(xù)的免疫反應(yīng)有影響么？

另外具體指的是那一種，能否提供詳細(xì)信息，謝謝！

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4樓2011-01-16 00:56:53

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Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-01-15 22:15:06:
我用PVDF膜染得好好的啊~
不過(guò)就算用膜來(lái)染色當(dāng)control，發(fā)文章的時(shí)候人家認(rèn)不認(rèn)的啊……
其實(shí)可以混一個(gè)已知量BSA當(dāng)內(nèi)參的

膜染色當(dāng)control 肯定是沒喲問題的，這個(gè)在很多文章，包括高影響力的雜志里都有有這種方法。

我的樣品的體液來(lái)的，里面幾乎還有各種蛋白，混入BSA做內(nèi)標(biāo)（類似于內(nèi)標(biāo)）可能也不太合適。

不知這位朋友有沒有混入BSA做內(nèi)參的具體文獻(xiàn)，方便的話，請(qǐng)?zhí)峁┮恍﹨⒖紖⒖�，謝謝！

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5樓2011-01-16 01:00:11

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dhd997(金幣+3):good 2011-01-16 11:54:51
scorpioneuro(金幣+1): 3x 2011-01-16 16:30:14

引用回帖:

Originally posted by scorpioneuro at 2011-01-16 01:00:11:

膜染色當(dāng)control 肯定是沒喲問題的，這個(gè)在很多文章，包括高影響力的雜志里都有有這種方法。

我的樣品的體液來(lái)的，里面幾乎還有各種蛋白，混入BSA做內(nèi)標(biāo)（類似于內(nèi)標(biāo)）可能也不太合適。

不知這位朋友 ...

體液就麻煩了……確實(shí)是存在缺乏內(nèi)參的問題
不過(guò)按照細(xì)胞因子蛋白芯片的經(jīng)驗(yàn)，公司他們是先把蛋白定好量，然后根據(jù)這個(gè)量來(lái)混入陽(yáng)性對(duì)照。然后就是孵膜后檢測(cè)（其實(shí)跟WB差不多），然后根據(jù)陽(yáng)性對(duì)照均一化數(shù)據(jù)

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6樓2011-01-16 09:53:45

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rainwander(金幣+1): 哈哈，又見到你了，生工男~~~ 2011-01-16 14:07:42
scorpioneuro(金幣+1): 3x 2011-01-16 16:30:21

Protein Stains P：超敏可逆印跡膜染色試劑盒II
產(chǎn)品說(shuō)明：常用的麗春紅對(duì)轉(zhuǎn)印膜上蛋白質(zhì)的檢測(cè)靈敏度不高，本試劑采用雙重染色法靈敏度高、低背景、蛋白條帶清晰和實(shí)驗(yàn)方便快速等優(yōu)點(diǎn)，最低能夠檢測(cè)出5ng的蛋白條帶。經(jīng)過(guò)適當(dāng)?shù)奶幚砗�，不影響轉(zhuǎn)印膜上蛋白質(zhì)的抗原性。可進(jìn)行Western blot，Dot blot等免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)。由染色液I, 脫色液和染色液II組成.儲(chǔ)存條件：18～25℃
編號(hào) 包裝價(jià)格產(chǎn)地
BSP025 10membranes 240 生工

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7樓2011-01-16 12:50:14

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Originally posted by xhjggl at 2011-01-16 12:50:14:
Protein Stains P：超敏可逆印跡膜染色試劑盒II
產(chǎn)品說(shuō)明：常用的麗春紅對(duì)轉(zhuǎn)印膜上蛋白質(zhì)的檢測(cè)靈敏度不高，本試劑采用雙重染色法靈敏度高、低背景、蛋白條帶清晰和實(shí)驗(yàn)方便快速等優(yōu)點(diǎn)，最低能夠檢測(cè)出5ng的蛋 ...

生工男你好~
生工男再見~

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8樓2011-01-16 13:07:42

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[quote]Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-01-16 13:07:42:

生工男你好~
生工男再見~ [/quot

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9樓2011-01-16 16:26:31

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其實(shí)我們只是染色的情況不固定，有時(shí)候可，有時(shí)候又不行（但還是有條帶）

重復(fù)過(guò)幾次都有類似情況

不知你的立春紅染色protocol是咋樣的？能否發(fā)上來(lái)借鑒下

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10樓2011-01-16 16:29:03

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dhd997(金幣+2): 當(dāng)然不是。我們也用。 2011-01-16 19:01:00
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引用回帖:

Originally posted by scorpioneuro at 2011-01-16 16:29:03:

其實(shí)我們只是染色的情況不固定，有時(shí)候可，有時(shí)候又不行（但還是有條帶）

重復(fù)過(guò)幾次都有類似情況

不知你的立春紅染色protocol是咋樣的？能否發(fā)上來(lái)借鑒下

我們用碧云天的快速麗春紅染液
洗掉的話就用普通TBST加大轉(zhuǎn)速多洗幾次就干凈了
（不是廣告，親身實(shí)驗(yàn)）

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11樓2011-01-16 18:56:22

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Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-01-16 18:56:22:

我們用碧云天的快速麗春紅染液
洗掉的話就用普通TBST加大轉(zhuǎn)速多洗幾次就干凈了
（不是廣告，親身實(shí)驗(yàn)）

xiexie ! 有實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，肯定沒有什么什么問題

只要對(duì)后續(xù)的免疫反應(yīng)物影響就ok了

試試看

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12樓2011-01-17 00:52:15

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