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wissl52100

銅蟲 (小有名氣)

[交流] 【求助/交流】蛋白質(zhì)含量測(cè)定問題

各位生物界的達(dá)人，請(qǐng)教個(gè)問題，我是材料學(xué)專業(yè)的，但是我的課題涉及到樣品蛋白質(zhì)含量的測(cè)定，我也查了一些資料，有很多方法，比如紫外分光光度法，開始要繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，我想問的是，大多數(shù)用的是牛血清蛋白做標(biāo)準(zhǔn)樣品，而我的樣品中蛋白質(zhì)類型不一樣，能否參照標(biāo)準(zhǔn)曲線。還有既然是標(biāo)準(zhǔn)曲線我是不是不用自己繪制，直接參照別人的，因?yàn)闃?biāo)準(zhǔn)樣品都是一樣的啊，但是我在網(wǎng)上查的很多標(biāo)準(zhǔn)曲線相差很大，都不一樣啊，請(qǐng)各位指導(dǎo)下？可能問的問題大家覺得可笑，但還是想聽下大家的意見！謝謝~~~~
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wissl52100

銅蟲 (小有名氣)
還有個(gè)問題，就是做紫外的時(shí)候，好像樣品的蛋白質(zhì)濃度有范圍規(guī)定，在0.1~1mg/ml之間，但是我的樣品我也不知道蛋白質(zhì)的濃度在什么范圍內(nèi)，那該怎么辦��？
2樓2011-01-17 20:16:38
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wuw579

鐵桿木蟲 (正式寫手)
★
rainwander(金幣+1): 鼓勵(lì)積極參與交流~~~ 2011-01-17 22:53:31
wissl52100(金幣+2): 2011-01-18 10:41:48
標(biāo)準(zhǔn)曲線還是要自己做，不同人不同儀器不同操作方法得出來的結(jié)果都不一樣。
選擇標(biāo)準(zhǔn)蛋白也要因試驗(yàn)而異。
可以多做幾個(gè)梯度。
3樓2011-01-17 20:25:13
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henkally

禁蟲 (著名寫手)
wissl52100(金幣+2): 謝謝~ 2011-01-18 10:41:34
本帖內(nèi)容被屏蔽
7樓2011-01-18 10:27:12
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xhjggl

木蟲 (正式寫手)
wissl52100(金幣+2): 謝謝 2011-01-18 14:03:19
買個(gè)試劑盒就可以了，上海生工有
BCA Protein Assay Kit
BCA蛋白質(zhì)定量檢測(cè)試劑盒       
產(chǎn)品說明：BCA法是理想的蛋白質(zhì)定量方法，在堿性環(huán)境下蛋白質(zhì)分子中肽鍵結(jié)構(gòu)與Cu2+絡(luò)合并將Cu2+還原成Cu1+。BCA特異地與Cu1結(jié)合形成穩(wěn)定的紫藍(lán)色復(fù)合物，在562 nM處有最大的光吸收值并與蛋白質(zhì)濃度成正比，顏色的深淺與蛋白質(zhì)的含量成正比，可以根據(jù)吸收值測(cè)定蛋白質(zhì)濃度。該測(cè)定方法靈敏度高，操作簡(jiǎn)單，試劑及其形成的顏色復(fù)合物穩(wěn)定性俱佳，并且受干擾物質(zhì)去垢劑等影響小。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
1.準(zhǔn)確靈敏，線性范圍廣，BCA試劑的蛋白質(zhì)測(cè)定范圍是25－500μg/ml;
2.快速：45分鐘內(nèi)完成測(cè)定，比經(jīng)典的Lowry法快4倍而且更加方便;
3.不受樣品中離子型和非離子型去污劑影響;
4.檢測(cè)不同蛋白質(zhì)分子的變異系數(shù)遠(yuǎn)小于考馬氏亮藍(lán),可以酶標(biāo)板法或分光光度計(jì)法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度。
編號(hào)        包裝        價(jià)格        產(chǎn)地
SK3021        500 Assays        450        生工
8樓2011-01-18 12:36:33
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匿名

用戶注銷 (正式寫手)
★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
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23樓2012-10-30 17:03:49
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普通回帖

wissl52100

銅蟲 (小有名氣)
引用回帖:
Originally posted by wuw579 at 2011-01-17 20:25:13:
標(biāo)準(zhǔn)曲線還是要自己做，不同人不同儀器不同操作方法得出來的結(jié)果都不一樣。
選擇標(biāo)準(zhǔn)蛋白也要因試驗(yàn)而異。
可以多做幾個(gè)梯度。

什么叫多做幾個(gè)梯度？我看一些資料中寫到蛋白質(zhì)含量可以直接算出：c=1.45A280-0.74A260     這是不是說可以不用做標(biāo)準(zhǔn)曲線了，我的課題在蛋白質(zhì)含量測(cè)量不用特別精確，直接按上式算可取嗎？
還我我2樓提到的這個(gè)問題，樣品蛋白質(zhì)含量范圍無(wú)法確定，該怎么辦？

還請(qǐng)賜教！謝謝~
4樓2011-01-17 21:48:37
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wissl52100

銅蟲 (小有名氣)
自己頂:dnd:
5樓2011-01-18 09:19:08
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wqj1988926

金蟲 (正式寫手)
wissl52100(金幣+2): 2011-01-18 10:41:42
標(biāo)準(zhǔn)曲線得自己做，我們一般就用牛血清蛋白的
6樓2011-01-18 10:12:24
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rainwander

鐵桿木蟲 (知名作家)
引用回帖:
Originally posted by xhjggl at 2011-01-18 12:36:33:
買個(gè)試劑盒就可以了，上海生工有
BCA Protein Assay Kit
BCA蛋白質(zhì)定量檢測(cè)試劑盒       
產(chǎn)品說明：BCA法是理想的蛋白質(zhì)定量方法，在堿性環(huán)境下蛋白質(zhì)分子中肽鍵結(jié)構(gòu)與Cu2+絡(luò)合并將Cu2+還原成Cu1+。BCA特異地與Cu1結(jié) ...

是你嗎？生工男
9樓2011-01-18 15:21:57
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wuw579

鐵桿木蟲 (正式寫手)
對(duì)了 用試劑盒也可以   而且你也說了你的蛋白與BSA性質(zhì)不同  怎么可以用別人的標(biāo)準(zhǔn)曲線呢   梯度就按你查到的做就可以了
10樓2011-01-18 19:13:00
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xinmeihappy

金蟲 (初入文壇)
當(dāng)?shù)鞍讟悠返奈馐毡戎礎(chǔ)280／A260約為1.8，可用下面的公試進(jìn)行計(jì)算：
蛋白質(zhì)濃度（mg/ml）＝（1.45A280 －0.74A260）×K
11樓2011-01-19 10:28:53
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juno_j

銅蟲 (初入文壇)
★ ★
西瓜(金幣+2): 鼓勵(lì)交流 2011-04-10 18:46:15
自己做標(biāo)線不麻煩的，選擇和你樣品中物質(zhì)相同的蛋白質(zhì)做標(biāo)線就好。如果對(duì)準(zhǔn)確度要求不是很高，直接用牛血清蛋白的標(biāo)線也行的，但是最好自己做。

樣品的濃度確定，你可以自己試下，配不同濃度的樣品溶液，和標(biāo)線一起做，只要出來的分光光度計(jì)的讀數(shù)在標(biāo)線讀數(shù)的范圍內(nèi)，就說明是合適的。標(biāo)線上限外的就稀釋，標(biāo)線下限以下的就提高初始濃度
12樓2011-04-08 15:48:32
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gppwfh

金蟲 (正式寫手)
引用回帖:
Originally posted by wissl52100 at 2011-01-17 20:12:14:
各位生物界的達(dá)人，請(qǐng)教個(gè)問題，我是材料學(xué)專業(yè)的，但是我的課題涉及到樣品蛋白質(zhì)含量的測(cè)定，我也查了一些資料，有很多方法，比如紫外分光光度法，開始要繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，我想問的是，大多數(shù)用的是牛血清蛋白做標(biāo)準(zhǔn) ...

多做幾個(gè)梯度
13樓2011-04-08 16:30:32
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ujsyangyong

鐵桿木蟲 (著名寫手)
★
西瓜(金幣+1): 贊成！ 2011-04-10 18:46:40
標(biāo)準(zhǔn)曲線還是要自己做，不同人不同儀器不同操作方法得出來的結(jié)果都不一樣。買個(gè)BCA蛋白定量試劑盒，按照說明書操作就可以了。標(biāo)準(zhǔn)曲線有線性范圍的，如果測(cè)出來的樣品濃度不在這個(gè)區(qū)間，則必須進(jìn)行稀釋后再測(cè)。
14樓2011-04-10 11:48:59
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0640409

銀蟲 (小有名氣)
★ ★
西瓜(金幣+2): 鼓勵(lì)新蟲交流 2011-04-14 22:32:00
標(biāo)曲每次做都要自己做，不能用別人的
15樓2011-04-14 21:29:33
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guohq0316

新蟲 (初入文壇)
★
小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖
引用回帖:
8樓: Originally posted by xhjggl at 2011-01-18 12:36:33:
買個(gè)試劑盒就可以了，上海生工有
BCA Protein Assay Kit
BCA蛋白質(zhì)定量檢測(cè)試劑盒       
產(chǎn)品說明：BCA法是理想的蛋白質(zhì)定量方法，在堿性環(huán)境下蛋白質(zhì)分子中肽鍵結(jié)構(gòu)與Cu2+絡(luò)合并將Cu2+還原成Cu1+。BCA特異地與Cu1結(jié) ...

你好：我需要測(cè)定豆餅粉中蛋白質(zhì)的含量，請(qǐng)教我該如何去做，因?yàn)槎癸灧鄄灰巳芙�，在pH=7時(shí)的磷酸緩沖鹽中部分溶解但也不保證蛋白質(zhì)完全溶解，急...凱氏定氮法不準(zhǔn)確。不知道該如何辦？
16樓2011-08-04 15:58:32
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carot

金蟲 (正式寫手)
★
小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖
曲線肯定要自己做 而且每一次測(cè)量都要做的 建議用試劑盒比較好
17樓2011-12-06 09:40:00
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落滿夏天

銀蟲 (正式寫手)
★
小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖
小丹木木(金幣+3): 鼓勵(lì)交流 2012-02-13 17:57:15
我們用的是lowry法,你的線性梯度可以這么設(shè)置,牛血清蛋白稀釋到0.1mg每毫升,精確稀釋,然后梯度是,0ul,200ul,400ul,600ul,800ul,1000ul,統(tǒng)一用水補(bǔ)到1ml.樣品的話稀釋到濃度50ug每毫升.
但是這個(gè)方法影響因素多,得研究下你的緩沖體系有沒有影響物質(zhì),一般有氧化還原的東西都不行,BCA原理也是氧化還原,考染的話我很少做,但是個(gè)人覺得這方法誤差可能大些.另外關(guān)鍵的一點(diǎn)是你所測(cè)的蛋白結(jié)構(gòu)不能與牛血清蛋白差太多,差太多就沒有意義了.紫外掃描的話是苯環(huán)狀氨基酸吸收,純度好的話可以用,建議你兩種方法對(duì)比研究.
18樓2012-02-13 17:24:02
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落滿夏天

銀蟲 (正式寫手)
對(duì)了,忘記說了,線性自己做,你的濃度不同線性結(jié)果頁(yè)不同,可以拿excl表做,紫外風(fēng)光光度計(jì)的話也可以.
19樓2012-02-13 17:25:32
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colorfulmiao

木蟲 (小有名氣)
★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
引用回帖:
1560425樓: Originally posted by guohq0316 at 2011-08-04 15:58:32:
你好：我需要測(cè)定豆餅粉中蛋白質(zhì)的含量，請(qǐng)教我該如何去做，因?yàn)槎癸灧鄄灰巳芙猓趐H=7時(shí)的磷酸緩沖鹽中部分溶解但也不保證蛋白質(zhì)完全溶解，急...凱氏定氮法不準(zhǔn)確。不知道該如何辦？

根據(jù)我的知識(shí)，如果樣品不易溶解，目前的蛋白濃度測(cè)定都不行的，因?yàn)楝F(xiàn)在的考馬斯、BCA方法測(cè)定都是比色法的，蛋白不溶解就沒辦法比色了呀。
20樓2012-05-14 11:12:49
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wyzmkm

鐵蟲 (初入文壇)
★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
請(qǐng)問，用紫外分光光度法測(cè)球狀蛋白的含量時(shí)，如何選擇標(biāo)準(zhǔn)蛋白？
21樓2012-10-19 21:07:49
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匿名

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22樓2012-10-30 17:00:30
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匿名

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24樓2013-10-08 14:10:43
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露露愛魚魚

新蟲 (初入文壇)
★
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引用回帖:
18樓: Originally posted by 落滿夏天 at 2012-02-13 17:24:02
我們用的是lowry法,你的線性梯度可以這么設(shè)置,牛血清蛋白稀釋到0.1mg每毫升,精確稀釋,然后梯度是,0ul,200ul,400ul,600ul,800ul,1000ul,統(tǒng)一用水補(bǔ)到1ml.樣品的話稀釋到濃度50ug每毫升.
但是這個(gè)方法影響因素多,得研 ...

你好，我也想用LOWRY法測(cè)蛋白質(zhì)，請(qǐng)問下你們的具體操作方法有么，我看了好多方法，都特別麻煩，可以用下你們的方法么，謝謝
25樓2017-02-11 13:12:34
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