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[交流] 【求助/交流】瓊脂糖電泳1×TAE配的不好用什么后果

取了20ml 50×TAE, 定容到1000ml，晃了幾下，然后就用來(lái)制膠了，但是PCR電泳的結(jié)果不好，條帶很弱，而且上午跑出來(lái)的幾條帶，竟然沒(méi)跑出來(lái)。現(xiàn)在懷疑1×TAE沒(méi)混勻，這樣會(huì)導(dǎo)致什么樣的后果呢？ TAE怎么配才能讓結(jié)果完美呢

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1樓 2011-01-18 10:17:58

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lxj341401

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xnbioinfor(金幣+1):謝謝參與
rainwander(金幣+1): 鼓勵(lì)積極參與交流~~~ 2011-01-18 15:08:14

引用回帖:

Originally posted by xnbioinfor at 2011-01-18 10:17:58:
取了20ml 50×TAE, 定容到1000ml，晃了幾下，然后就用來(lái)制膠了，但是PCR電泳的結(jié)果不好，條帶很弱，而且上午跑出來(lái)的幾條帶，竟然沒(méi)跑出來(lái)�，F(xiàn)在懷疑1×TAE沒(méi)混勻，這樣會(huì)導(dǎo)致什么樣的后果呢？ TAE怎么配才能讓 ...

TAE沒(méi)混勻，離子強(qiáng)度和pH就有問(wèn)題，對(duì)電泳肯定有影響。
要讓結(jié)果完美也不單單是TAE的問(wèn)題了，各個(gè)步驟都要注意。

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2樓2011-01-18 10:34:25

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feng__

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xnbioinfor(金幣+1):謝謝參與
silicare(金幣+2): 謝謝參與 2011-01-18 15:32:58

MAKER有問(wèn)題么？

貌似也不至于跑不出來(lái)?xiàng)l帶吧，不勻的話應(yīng)該是條帶不是直的，歪歪扭扭的那樣吧，呵呵，么試過(guò)#17

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3樓2011-01-18 10:35:50

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天使托

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xnbioinfor(金幣+1):謝謝參與
silicare(金幣+1): 完全溶解很重要 2011-01-18 15:33:13

首先要確保緩沖液混勻了，然后溶膠也要完全溶解。

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4樓2011-01-18 10:46:14

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real339

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經(jīng)常也是這么配的啊，不至于這么大問(wèn)題吧

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5樓2011-01-18 11:18:35

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real339

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xnbioinfor(金幣+1):謝謝參與
silicare(金幣+1): 謝謝參與 2011-01-18 15:33:35

如果你確定不是點(diǎn)樣，染色，DNA等原因那可能真是膠的問(wèn)題了

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6樓2011-01-18 11:19:47

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hello466725

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xnbioinfor(金幣+1):謝謝參與
rainwander(金幣+1): 鼓勵(lì)積極參與交流~~~ 2011-01-18 15:08:50

都是這么配的。
如果PCR做的過(guò)程不出任何問(wèn)題，TAE搖勻跑，電泳不會(huì)出問(wèn)題噠。
要是沒(méi)有搖勻，最多就是跑出來(lái)?xiàng)l帶不整齊，但不至于跑不出來(lái)。
跑不出來(lái)的話，得考慮你的PCR條件問(wèn)題了。

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7樓2011-01-18 12:22:06

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haitian0625

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xnbioinfor(金幣+1):謝謝參與
silicare(金幣+1): 謝謝參與 2011-01-18 15:33:50

我感覺(jué)電泳液對(duì)于一般的電泳而言，沒(méi)有太大要求的。

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8樓2011-01-18 14:56:42

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rainwander

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xnbioinfor(金幣+1):謝謝參與
silicare(金幣+1): marker 是個(gè)好東西 2011-01-18 15:34:10

對(duì)了，你的Marker怎么樣？有條帶嗎？

如果Marker有條帶的話，那就不是TAE跟膠的問(wèn)題了，

如果Marker也沒(méi)有條帶，那就可能是TAE跟膠的問(wèn)題。

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9樓2011-01-18 15:10:04

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skkyy88888

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silicare(金幣+1): 不排除這個(gè)原因 2011-01-18 15:34:20

應(yīng)該是染料的問(wèn)題吧。

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10樓2011-01-18 15:31:09

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zhangxn2010

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小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流

我每次都是用一升量筒配TAE，蓋住量筒口上下顛倒幾次，效果挺好的；
不只是這樣，電泳槽里緩沖液加新的也要拿梳子之類的攪一下，否則跑出來(lái)不好看，嘿嘿，這些是我的小建議。

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11樓2011-01-18 19:17:29

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luckyzhumin

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小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖

先要看下Marker條帶是否清晰了，如果清晰，就是你DNA樣品的問(wèn)題了，如果Marker也不清晰，那就可能是染料與樣品比例沒(méi)控制好，也可能制膠時(shí)瓊脂比例或緩沖液的問(wèn)題了。

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12樓2013-03-17 22:06:58

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