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[交流]
【求助/交流】菌種冷凍干燥保存的問題
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1. 安瓿瓶哪里買？那種長頸小容量瓶樣式的瓶子算安瓿瓶嗎，哪里可以買？ 2. 能否將菌液（加了脫脂牛奶）先冷凍，然后直接在真空干燥機里抽真空？ 3. 冷凍干燥需要專用的設備嗎？像2.那樣抽成真空用脫脂棉塞住或用噴燈熔封是否可以？ |
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3樓2011-02-16 08:56:21
2樓2011-02-16 08:53:56
★ ★
翱宇(金幣+2): 鼓勵交流 2011-02-16 12:56:31
love_in_em(金幣+1): 謝謝 2011-02-17 08:24:21
翱宇(金幣+2): 鼓勵交流 2011-02-16 12:56:31
love_in_em(金幣+1): 謝謝 2011-02-17 08:24:21
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樓主可以參考下面的方法 真空冷凍干燥法 將微生物冷凍，在減壓下利用升華作用除去水分，使細胞的生理活動趨于停止，從而長期維持存活狀態(tài)。 操作步驟如下： 好氧菌冷凍干燥管的制備 1 安瓿管準備 安瓿管材料以中性玻璃為宜。清洗安瓿管時，先用2%鹽酸浸泡過夜，自來水沖洗干凈后，用蒸餾水浸泡至pH中性，干燥后、貼上標簽，標上菌號及時間，加入脫脂棉塞后，121℃下高壓滅菌15-20分鐘，備用。 2 保護劑的選擇和準備 保護劑種類要根據(jù)微生物類別選擇。配制保護劑時，應注意其濃度及pH值，以及滅菌方法。如血清，可用過濾滅菌；牛奶要先脫脂，用離心方法去除上層油脂，一般在100℃間歇煮沸2-3次，每次10-30分鐘，備用。 3 凍干樣品的準備 在最適宜的培養(yǎng)條件下將細胞培養(yǎng)至靜止期或成熟期，進行純度檢查后（參見科技部自然科技資源平臺聯(lián)合管理辦公室文件《微生物菌種純度檢測技術規(guī)程》（試行）），與保護劑混合均勻，分裝。微生物培養(yǎng)物濃度以細胞或孢子不少于108-1010個/ml為宜（以大腸桿菌為例，為了取得每毫升1010個活細胞菌液2毫升-2.5毫升，只需10毫升瓊脂斜面兩支）。采用較長的毛細滴管，直接滴入安瓿管底部，注意不要濺污上部管壁，每管分裝量約0.1-0.2毫升，若是球形安瓿管，裝量為半個球部。若是液體培養(yǎng)的微生物，應離心去除培養(yǎng)基，然后將培養(yǎng)物與保護劑混勻，再分裝于安瓿管中。分裝安瓿管時間盡量要短，最好在1-2小時內分裝完畢并預凍。分裝時應注意在無菌條件下操作。 4 預凍 一般預凍2小時以上，溫度達到-20℃到-35℃左右。 5 冷凍干燥 采用冷凍干燥機進行冷凍干燥。 將冷凍后的樣品安瓿管置于冷凍干燥機的干燥箱內，開始冷凍干燥，時間一般為8-20小時。 6 真空封口及真空檢驗 將安瓿管頸部用強火焰拉細，然后采用真空泵抽真空，在真空條件下將安瓿管頸部加熱熔封。 熔封后的干燥管可采用高頻電火花真空測定儀測定真空度。 7 保藏 安瓿管應低溫避光保藏。 8 質量檢查 冷凍干燥后抽取若干支安瓿管進行各項指標檢查，如存活率、生產(chǎn)能力、形態(tài)變異、雜菌污染等。 厭氧菌冷凍干燥管的制備 主要程序與需氧菌操作相同，注意保護劑的選擇和準備，保護劑使用前應在100℃的沸水中煮沸15分鐘左右，脫氣后放入冷水中急冷，除掉保護劑中的溶解氧。 復蘇方法 —— 先用70%酒精棉花擦拭安瓿上部， —— 將安瓿管頂部燒熱， —— 用無菌棉簽沾冷水，在頂部擦一圈，頂部出現(xiàn)裂紋，用挫刀或鑷子頸部輕叩一下，敲下已開裂的安瓿管的頂端， —— 用無菌水或培養(yǎng)液溶解菌塊，使用無菌吸管移入新鮮培養(yǎng)基上，進行適溫培養(yǎng)。 參考 http://www.china-cicc.org/preserve/index.html |
4樓2011-02-16 12:38:39
5樓2011-02-17 15:19:19
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