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shihongling金蟲 (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】RNA峰度不夠！ 已有7人參與
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| 提取目的基因RNA后做RT-PCR，總是P不出來(lái)，用DNA做就可以P出來(lái)，是不是RNA峰度不夠啊？怎么提高RNA峰度呢？我試過(guò)添加誘導(dǎo)物了，還是做不出來(lái)！請(qǐng)教大家了！ |
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holyala
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小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流
dhd997(金幣+5): good 2011-02-19 20:59:46
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dhd997(金幣+5): good 2011-02-19 20:59:46
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我覺得先用內(nèi)參基因做個(gè)陽(yáng)性PCR對(duì)照吧，看看是不是模板的問(wèn)題，用oligo dT對(duì)一些距離PolyA比較近的基因有好的反轉(zhuǎn)錄效果，可以同時(shí)加入oligo dT和random primer進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄 如果內(nèi)參條帶正常的話，就把循環(huán)數(shù)增加到一個(gè)苛刻的情況，比如40~50個(gè)循環(huán)，如果能夠獲得目的條帶或者在目的條帶的位置有彌散，可能就是豐度不高的原因了 如果沒有，也有可能是就是你的實(shí)驗(yàn)材料不表達(dá)你的基因，或者表達(dá)很低 |
9樓2011-02-19 20:27:11
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10樓2011-04-13 08:34:06
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