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【求助/交流】真菌分子鑒定問題 已有7人參與
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真菌分子鑒定里必須用到載體連接嗎？急~~~ |
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5樓2011-02-26 12:59:41
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小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖交流
rainwander(金幣+2): 鼓勵積極參與交流~~~ 2011-02-27 16:24:35
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖交流
rainwander(金幣+2): 鼓勵積極參與交流~~~ 2011-02-27 16:24:35
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不要緊，問吧。 因?yàn)镻CR可能有非特異性擴(kuò)增，造成除了目的條帶之外還有干擾條帶產(chǎn)生，他們都是用同一對引物擴(kuò)增得來的，所以在測定序列的時候會在同一個堿基的位置上出現(xiàn)兩個堿基反應(yīng)同等強(qiáng)度，不知道正確的序列中應(yīng)該是其中的哪一個，所以為了保證產(chǎn)物純度，最保險的方法就是將PCR產(chǎn)物跑電泳，回收預(yù)計大小的條帶。我以前是在有雜帶時就會回收才送測，現(xiàn)在是寫明目的條帶在哪里，直接將PCR產(chǎn)物送測，讓他們回收。花費(fèi)是稍微多一點(diǎn)，但我的樣品有二十幾個，一個人回收要很久，公司人多，這樣我得到結(jié)果就快得多。 |
7樓2011-02-27 14:20:26
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9樓2011-02-27 16:13:39
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小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖交流
lstt09nk(金幣+3): 很詳細(xì)，感謝淀粉酶~· 2011-02-28 14:09:59
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lstt09nk(金幣+3): 很詳細(xì)，感謝淀粉酶~· 2011-02-28 14:09:59
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這個我沒想過，一直用TAE，因?yàn)槲覒械门�，就借別人的，別人剛好有的是TAE母液我就用TAE了。我不知道用TBE效果會怎樣，但是用TAE是可以的。 PCR完了之后跑電泳，看到有想要的產(chǎn)物產(chǎn)生，就將PCR產(chǎn)物送去測序。意思是假如說一個PCR體系是一共25微升的，PCR完了之后就取2微升電泳，看到在大約600bp處有條帶，就將剩下的23微升送去測序，測序單上寫明PCR未純化，表示讓他們來純化�？赡�23微升還達(dá)不到測序要求的量，那就做多幾管得到大量，如果濃度不夠高就真空蒸發(fā)提高濃度。 |
13樓2011-02-28 14:00:04
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