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sai00fuji

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[交流] 【求助/交流】關(guān)于建立cDNA文庫(kù)的諸多問(wèn)題，拜請(qǐng)解答

1、clontech的smarter kit大家有米有用過(guò)？效果怎樣？
invitrogen的有用過(guò)的米？多少錢(qián)買(mǎi)的？效果捏?
2、質(zhì)粒文庫(kù)跟酵母文庫(kù)差別大嗎？我想篩est，然后做表達(dá)。
3、clontech的技術(shù)客服說(shuō)起始不用mRNA也可以，用總RNA就行，還聲稱(chēng)10ng總RNA就可以。大家覺(jué)得靠譜嗎？
4、關(guān)于mRNA質(zhì)量的驗(yàn)證，說(shuō)是有smear，smear是什么樣子的？能否提供圖片，實(shí)在不行文字說(shuō)明，舉例子，打比方都行。
5、載體選擇上有沒(méi)有什么講究？

To check quality, analyze 100 ng of your mRNA using a Bioanalyzer, or by
performing agarose gel electrophoresis using a 1% E-Gel® EX Gel (see page 45 for ordering information). Your mRNA will appear as a smear, with the greatest intensity in the range of 1 to 3 kb. Some rRNA bands may still be faintly visible. If you do not detect a smear, or if the majority of the smear is significantly lessthan 1 kb, you will need to repeat the RNA isolation. Be sure to follow the recommendations listed on the previous page to prevent RNase contamination.

這里關(guān)于mRNA電泳的描述，我能否認(rèn)為smear是彌散的條帶。。。。

謝謝各位啦！！
鞠躬！！

[ Last edited by sai00fuji on 2011-2-26 at 20:42 ]

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1樓 2011-02-25 19:18:59

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sai00fuji

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引用回帖:

Originally posted by brightfuture01 at 2011-02-25 21:31:38:
1, 這些試劑盒價(jià)格都不菲，我沒(méi)有用過(guò)。見(jiàn)過(guò)視頻上用過(guò)Cosmid or Fosmid eDNA library Kit，感覺(jué)不錯(cuò)。

4,可以給你提供一個(gè)smear 的圖片：

5,做文庫(kù)時(shí)候載體要 ...

請(qǐng)問(wèn)是什么視頻��？哪家公司的？
這兩個(gè)都是smear嗎？mRNA純化的好是這樣嗎？

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3樓2011-02-25 22:05:44

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brightfuture01

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翱宇(金幣+1): 謝謝交流 2011-02-25 21:32:05
sai00fuji(金幣+8): 謝謝 2011-02-25 22:04:23

1, 這些試劑盒價(jià)格都不菲，我沒(méi)有用過(guò)。見(jiàn)過(guò)視頻上用過(guò)Cosmid or Fosmid eDNA library Kit，感覺(jué)不錯(cuò)。

4,可以給你提供一個(gè)smear 的圖片：

5,做文庫(kù)時(shí)候載體要高效，比如連接效率，轉(zhuǎn)化效率；另外還有滿足容納片段的大小要求。

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2樓2011-02-25 21:31:38

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路人甲007

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sai00fuji(金幣+12): 2011-02-26 17:15:37

1.用過(guò)clontech的不錯(cuò)，invitrogen的沒(méi)有用過(guò)，不敢評(píng)價(jià)，不過(guò)invitrogen也是大牌子，具體選擇什么試劑盒還是樓主你比較一下兩個(gè)試劑盒的說(shuō)明書(shū)最好
2.通常的文庫(kù)都是測(cè)序用的，除非特殊的試劑盒，例如酵母雙雜交文庫(kù)試劑盒。我看你的目的應(yīng)該就是構(gòu)建一個(gè)普通的cDNA文庫(kù)，然后測(cè)序，然后選擇目的的基因酵母表達(dá)吧。
3.clontech的SMART就是直接用的總RNA，你看一下說(shuō)明書(shū)就知道了，不用純化mRNA的
4.smear說(shuō)的是雙鏈cDNA，類(lèi)似于沙發(fā)發(fā)的圖，好的雙鏈圖譜是smear+幾條特征帶，因樣品不同而異
5.不知道你說(shuō)的什么載體，是構(gòu)建文庫(kù)的載體嗎，每一種試劑盒都有固定的載體。一般選擇質(zhì)粒的載體吧

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4樓2011-02-25 22:51:39

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sai00fuji

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引用回帖:

Originally posted by 路人甲007 at 2011-02-25 22:51:39:
1.用過(guò)clontech的不錯(cuò)，invitrogen的沒(méi)有用過(guò)，不敢評(píng)價(jià)，不過(guò)invitrogen也是大牌子，具體選擇什么試劑盒還是樓主你比較一下兩個(gè)試劑盒的說(shuō)明書(shū)最好
2.通常的文庫(kù)都是測(cè)序用的，除非特殊的試劑盒，例如酵母雙雜交 ...

再具體問(wèn)一下，clontech的kit，起始需要總RNA大約多少？全長(zhǎng)率能達(dá)到多少？

To check quality, analyze 100 ng of your mRNA using a Bioanalyzer, or by
performing agarose gel electrophoresis using a 1% E-Gel® EX Gel (see page 45 for ordering information). Your mRNA will appear as a smear, with the greatest intensity in the range of 1 to 3 kb. Some rRNA bands may still be faintly visible. If you do not detect a smear, or if the majority of the smear is significantly lessthan 1 kb, you will need to repeat the RNA isolation. Be sure to follow the recommendations listed on the previous page to prevent RNase contamination.

這里關(guān)于mRNA電泳的描述，我能否認(rèn)為smear是彌散的條帶。。。。
謝謝~

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6樓2011-02-26 17:33:53

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