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sai00fuji金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[交流]
【求助/交流】關(guān)于建立cDNA文庫(kù)的諸多問(wèn)題，拜請(qǐng)解答
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1、clontech的smarter kit大家有米有用過(guò)？效果怎樣？ invitrogen的有用過(guò)的米？多少錢(qián)買(mǎi)的？效果捏? 2、質(zhì)粒文庫(kù)跟酵母文庫(kù)差別大嗎？我想篩est，然后做表達(dá)。 3、clontech的技術(shù)客服說(shuō)起始不用mRNA也可以，用總RNA就行，還聲稱(chēng)10ng總RNA就可以。大家覺(jué)得靠譜嗎？ 4、關(guān)于mRNA質(zhì)量的驗(yàn)證，說(shuō)是有smear，smear是什么樣子的？能否提供圖片，實(shí)在不行文字說(shuō)明，舉例子，打比方都行。 5、載體選擇上有沒(méi)有什么講究？ To check quality, analyze 100 ng of your mRNA using a Bioanalyzer, or by performing agarose gel electrophoresis using a 1% E-Gel® EX Gel (see page 45 for ordering information). Your mRNA will appear as a smear, with the greatest intensity in the range of 1 to 3 kb. Some rRNA bands may still be faintly visible. If you do not detect a smear, or if the majority of the smear is significantly lessthan 1 kb, you will need to repeat the RNA isolation. Be sure to follow the recommendations listed on the previous page to prevent RNase contamination. 這里關(guān)于mRNA電泳的描述，我能否認(rèn)為smear是彌散的條帶。。。。 謝謝各位啦��！ 鞠躬��！ [ Last edited by sai00fuji on 2011-2-26 at 20:42 ] |
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lstt09nk(金幣+3): 鼓勵(lì)參與交流 2011-02-26 09:05:29
sai00fuji(金幣+12): 2011-02-26 17:15:37
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sai00fuji(金幣+12): 2011-02-26 17:15:37
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1.用過(guò)clontech的不錯(cuò)，invitrogen的沒(méi)有用過(guò)，不敢評(píng)價(jià)，不過(guò)invitrogen也是大牌子，具體選擇什么試劑盒還是樓主你比較一下兩個(gè)試劑盒的說(shuō)明書(shū)最好 2.通常的文庫(kù)都是測(cè)序用的，除非特殊的試劑盒，例如酵母雙雜交文庫(kù)試劑盒。我看你的目的應(yīng)該就是構(gòu)建一個(gè)普通的cDNA文庫(kù)，然后測(cè)序，然后選擇目的的基因酵母表達(dá)吧。 3.clontech的SMART就是直接用的總RNA，你看一下說(shuō)明書(shū)就知道了，不用純化mRNA的 4.smear說(shuō)的是雙鏈cDNA，類(lèi)似于沙發(fā)發(fā)的圖，好的雙鏈圖譜是smear+幾條特征帶，因樣品不同而異 5.不知道你說(shuō)的什么載體，是構(gòu)建文庫(kù)的載體嗎，每一種試劑盒都有固定的載體。一般選擇質(zhì)粒的載體吧 |
4樓2011-02-25 22:51:39
brightfuture01
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再具體問(wèn)一下，clontech的kit，起始需要總RNA大約多少？全長(zhǎng)率能達(dá)到多少？ To check quality, analyze 100 ng of your mRNA using a Bioanalyzer, or by performing agarose gel electrophoresis using a 1% E-Gel® EX Gel (see page 45 for ordering information). Your mRNA will appear as a smear, with the greatest intensity in the range of 1 to 3 kb. Some rRNA bands may still be faintly visible. If you do not detect a smear, or if the majority of the smear is significantly lessthan 1 kb, you will need to repeat the RNA isolation. Be sure to follow the recommendations listed on the previous page to prevent RNase contamination. 這里關(guān)于mRNA電泳的描述，我能否認(rèn)為smear是彌散的條帶。。。。 謝謝~ |
6樓2011-02-26 17:33:53
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8樓2011-02-26 20:44:35
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11樓2013-07-10 20:26:48
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