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ksnight

金蟲 (正式寫手)


[交流] 【求助/交流】用過葡聚糖凝膠的請進(jìn)。。

1.        目的:目標(biāo)分子Mw=5300  雜質(zhì)分子2000,及3300。分離總量約150mg 其中目標(biāo)分子量約50mg。 雜質(zhì)和目標(biāo)分子均水溶。(上的量是否太多?)
2.        方法:采用Sephadex-G25 (普通)1000-5000。床體積4-6ml/g 折中算5,用的柱子是內(nèi)徑2cm,長度35cm,柱床體積110ml。計(jì)劃用干凝膠約25g,(干凝膠量是否合適?裝柱長度是否合適?)一般情況下,柱床體積和外水體積的比例是多少?用此種類型的凝膠,目標(biāo)分子不保留,直接流出,雜質(zhì)分子在里面保留一定時間,達(dá)到分離目的。

凝膠預(yù)處理和裝柱子:1,用蒸餾水溶脹8h,傾倒除去一些小的漂浮的凝膠。2,再倒入沸水中約0.5h,除去氣泡。冷卻后填柱子(自然沉降)。(除去氣泡煮沸的時間是否足夠,長時間煮沸是否會破壞凝膠的結(jié)構(gòu)?)(是否需要用鹽水來進(jìn)行自然沉降?)(需要用鹽水來溶脹嗎?)(有必要用指示劑來確定柱子是否可用嗎?)

上樣:用2-5ml鹽水溶解后加入,然后用鹽水洗脫劑洗脫。待到收集到外水體積Vo后,開始把收集的水溶液用二氯甲烷萃取,干燥,濃縮,點(diǎn)板(TLC),換瓶收集,核磁分別確定是否分純。

沒有恒流泵怎么控制流速呢?

這是我的全過程,幫忙解決下以上問題,過程有什么地方有不妥的地方請指出,謝謝。!

[ Last edited by ksnight on 2011-2-28 at 20:16 ]
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rainwander(金幣+1): 鼓勵積極參與交流~~~ 2011-02-28 19:18:07
ksnight(金幣+2): 2011-02-28 19:18:43
ksnight(金幣+3): 2011-04-26 10:07:09
裝好柱之后用藍(lán)色葡聚糖來過,看柱效。上樣量我感覺大了些,分子量差別不大的物質(zhì),柱效稍微差一點(diǎn)就肯定分不開的。
2樓2011-02-28 18:35:37
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普通回帖

ksnight

金蟲 (正式寫手)


引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-02-28 18:35:37:
裝好柱之后用藍(lán)色葡聚糖來過,看柱效。上樣量我感覺大了些,分子量差別不大的物質(zhì),柱效稍微差一點(diǎn)就肯定分不開的。

我用的是G25  1000到5000  我的目標(biāo)分子是5300,
感覺可以直接出來。

量我也感覺多了點(diǎn),可能上個100mg差不多。

不知道標(biāo)準(zhǔn)的是怎樣
3樓2011-02-28 19:20:45
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ksnight(金幣+2): 3q 2011-02-28 20:19:35
ksnight(金幣+2): 2011-04-26 10:07:25
上樣量的體積要注意,太大不行的,如果要找標(biāo)準(zhǔn),那就找一下說明書。我記得似乎是推薦柱床體積的1%還是多少的。而且你的雜質(zhì)跟目的物質(zhì)分子量差別不大,感覺可能分開得不干凈,試著做一下吧。
4樓2011-02-28 19:52:57
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ksnight

金蟲 (正式寫手)


引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-02-28 19:52:57:
上樣量的體積要注意,太大不行的,如果要找標(biāo)準(zhǔn),那就找一下說明書。我記得似乎是推薦柱床體積的1%還是多少的。而且你的雜質(zhì)跟目的物質(zhì)分子量差別不大,感覺可能分開得不干凈,試著做一下吧。

推薦的確實(shí)是1%,我的大約柱床體積為110ml,也就是加1ml左右。

有說加樣大約是每ml床體積加0.2mg,這樣算下來只能加20mg,汗,100mg超太多了。

還有個基本的問題沒有明白,柱床體積就等于柱子的體積吧?
5樓2011-02-28 20:21:17
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柱床體積=外水體積(凝膠顆粒外部體積)+死水體積(凝膠顆粒體積)+可用體積(凝膠顆粒內(nèi)部孔徑體積,用于分子篩的有效體積,也稱內(nèi)水體積)

[ Last edited by 冼亮淀粉酶 on 2011-2-28 at 21:04 ]
6樓2011-02-28 21:03:25
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lingde_h

鐵蟲 (初入文壇)


我是90度水浴3h了
7樓2012-03-18 20:26:36
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zcczj

銅蟲 (正式寫手)



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你們裝多高呀,我用1.8的柱子
8樓2012-09-01 14:47:23
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miaomiaomao

金蟲 (小有名氣)



小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包,謝謝回帖
請問用鹽水作為洗脫劑該怎么配?濃度是多少?
9樓2013-04-01 11:45:21
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yanhonggai

新蟲 (初入文壇)



小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包,謝謝回帖
引用回帖:
9樓: Originally posted by miaomiaomao at 2013-04-01 11:45:21
請問用鹽水作為洗脫劑該怎么配?濃度是多少?

我們用的是0.1mol/l 的氯化鈉溶液。感覺還行,只是作對照實(shí)驗(yàn)時有點(diǎn)麻煩。
10樓2013-10-24 18:44:24
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miaomiaomao

金蟲 (小有名氣)



小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包,謝謝回帖
引用回帖:
10樓: Originally posted by yanhonggai at 2013-10-24 18:44:24
我們用的是0.1mol/l 的氯化鈉溶液。感覺還行,只是作對照實(shí)驗(yàn)時有點(diǎn)麻煩。...

那你們是怎么除鹽的。
11樓2013-10-31 11:24:13
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yanhonggai

新蟲 (初入文壇)


引用回帖:
11樓: Originally posted by miaomiaomao at 2013-10-31 11:24:13
那你們是怎么除鹽的啊?...

蒸餾水沖洗
12樓2013-10-31 20:40:23
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lshf0911

新蟲 (初入文壇)



小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包,謝謝回帖
你好,我現(xiàn)在正在做關(guān)于葡聚糖凝膠分離純化方面的試驗(yàn),和你做的比較相似,請教個問題。你的目標(biāo)分子是5300,用葡聚糖分離純化后其余的雜質(zhì)分子能夠去除徹底嗎?你用什么方法驗(yàn)證雜質(zhì)去除的呢?最后得到的物質(zhì)純度高嗎?
13樓2016-01-28 10:15:30
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方乘2016

新蟲 (初入文壇)



小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包,謝謝回帖
住床體積怎么求,公式不太會用

發(fā)自小木蟲Android客戶端
14樓2017-09-09 17:39:23
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pipadou

新蟲 (初入文壇)



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引用回帖:
7樓: Originally posted by lingde_h at 2012-03-18 20:26:36
我是90度水浴3h了

樓主,請問90度溶脹3h,期間要不時攪拌嗎?人要一直在那看著嗎,那得多熱啊,有沒有便捷的設(shè)備或操作可以用的?
15樓2024-08-10 15:18:21
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