ksnight

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[交流] 【求助/交流】用過葡聚糖凝膠的請進(jìn)！��！

1. 目的：目標(biāo)分子Mw=5300 雜質(zhì)分子2000，及3300。分離總量約150mg 其中目標(biāo)分子量約50mg。雜質(zhì)和目標(biāo)分子均水溶。（上的量是否太多？）
2. 方法：采用Sephadex-G25 （普通）1000-5000。床體積4-6ml/g 折中算5，用的柱子是內(nèi)徑2cm，長度35cm，柱床體積110ml。計劃用干凝膠約25g，（干凝膠量是否合適？裝柱長度是否合適？)一般情況下，柱床體積和外水體積的比例是多少？用此種類型的凝膠，目標(biāo)分子不保留，直接流出，雜質(zhì)分子在里面保留一定時間，達(dá)到分離目的。

凝膠預(yù)處理和裝柱子：1，用蒸餾水溶脹8h，傾倒除去一些小的漂浮的凝膠。2，再倒入沸水中約0.5h，除去氣泡。冷卻后填柱子（自然沉降）。（除去氣泡煮沸的時間是否足夠，長時間煮沸是否會破壞凝膠的結(jié)構(gòu)？）（是否需要用鹽水來進(jìn)行自然沉降？）（需要用鹽水來溶脹嗎？）（有必要用指示劑來確定柱子是否可用嗎？）

上樣：用2-5ml鹽水溶解后加入，然后用鹽水洗脫劑洗脫。待到收集到外水體積Vo后，開始把收集的水溶液用二氯甲烷萃取，干燥，濃縮，點板（TLC），換瓶收集，核磁分別確定是否分純。

沒有恒流泵怎么控制流速呢？

這是我的全過程，幫忙解決下以上問題，過程有什么地方有不妥的地方請指出，謝謝�。�！

[ Last edited by ksnight on 2011-2-28 at 20:16 ]

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1樓 2011-02-28 17:36:35

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ksnight

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Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-02-28 18:35:37:
裝好柱之后用藍(lán)色葡聚糖來過，看柱效。上樣量我感覺大了些，分子量差別不大的物質(zhì)，柱效稍微差一點就肯定分不開的。

我用的是G25 1000到5000 我的目標(biāo)分子是5300，
感覺可以直接出來。

量我也感覺多了點，可能上個100mg差不多。

不知道標(biāo)準(zhǔn)的是怎樣

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3樓2011-02-28 19:20:45

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冼亮淀粉酶

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★
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裝好柱之后用藍(lán)色葡聚糖來過，看柱效。上樣量我感覺大了些，分子量差別不大的物質(zhì)，柱效稍微差一點就肯定分不開的。

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2樓2011-02-28 18:35:37

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冼亮淀粉酶

禁蟲

ksnight(金幣+2): 3q 2011-02-28 20:19:35
ksnight(金幣+2): 2011-04-26 10:07:25

上樣量的體積要注意，太大不行的，如果要找標(biāo)準(zhǔn)，那就找一下說明書。我記得似乎是推薦柱床體積的1%還是多少的。而且你的雜質(zhì)跟目的物質(zhì)分子量差別不大，感覺可能分開得不干凈，試著做一下吧。

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4樓2011-02-28 19:52:57

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ksnight

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引用回帖:

Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-02-28 19:52:57:
上樣量的體積要注意，太大不行的，如果要找標(biāo)準(zhǔn)，那就找一下說明書。我記得似乎是推薦柱床體積的1%還是多少的。而且你的雜質(zhì)跟目的物質(zhì)分子量差別不大，感覺可能分開得不干凈，試著做一下吧。

推薦的確實是1%，我的大約柱床體積為110ml，也就是加1ml左右。

有說加樣大約是每ml床體積加0.2mg，這樣算下來只能加20mg，汗，100mg超太多了。

還有個基本的問題沒有明白，柱床體積就等于柱子的體積吧？

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5樓2011-02-28 20:21:17

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