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yuxuehanbing新蟲(chóng) (初入文壇)
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[交流]
【求助/交流】RNA抽提260/230比值很小 已有5人參與
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| 用Tirzol抽提組織總RNA，幾次試驗(yàn)結(jié)果260/280比值和電泳圖的結(jié)果都還不錯(cuò)，沒(méi)有蛋白質(zhì)和DNA的污染，但260/230比值都只在0.5左右，這是什么原因？？？？ |
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cxt86
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4樓2011-03-24 20:10:26
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3樓2011-03-24 14:31:10
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小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流
dhd997(金幣+8): 謝謝交流 2011-03-25 08:25:14
小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流
dhd997(金幣+8): 謝謝交流 2011-03-25 08:25:14
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前幾天有人問(wèn)過(guò)類似問(wèn)題了。 260/230的值，一般不要小于2.0，小的話表明有異硫氰酸胍，β-巰基乙醇或乙醇的殘留。補(bǔ)救的方法是再沉淀一次，然后重復(fù)乙醇洗滌的過(guò)程。但從我的經(jīng)驗(yàn)看，后面RNA丟得很多……因此提RNA時(shí)就注意了 個(gè)人經(jīng)驗(yàn)，260/230偏小的話，提取時(shí)可以改進(jìn)以下幾點(diǎn)： 1. 加氯仿抽提后取少一點(diǎn)上清，不要貪多。 2.加乙醇洗的時(shí)候，多晃幾次，盡量讓RNA沉淀整片懸浮起來(lái)（有時(shí)候確實(shí)浮不起來(lái)也沒(méi)辦法。） 3.棄乙醇的時(shí)候，用槍吸而不是傾倒，倒的話經(jīng)常有液滴留在管壁上，倒不干凈。第一次用藍(lán)槍頭吸，可以不完全吸干，免得吸到沉淀；然后短暫離心把殘余酒精甩到管底，看準(zhǔn)了用白槍頭盡量吸干凈。RNA量大，被白槍頭弄掉一點(diǎn)也沒(méi)關(guān)系。 4.溶解前晾干的時(shí)間可以長(zhǎng)一點(diǎn)，5分鐘也沒(méi)關(guān)系的。標(biāo)準(zhǔn)的做法說(shuō)是不能晾太久，等沉淀開(kāi)始變透明就要加水溶解，但是我晾過(guò)10分鐘的，后面RNA量也很大。可能量大，雖然有些溶解不了，最后濃度還是高。 可能不完全正確，但是以前我出現(xiàn)過(guò)260/230偏小的問(wèn)題，按上面方法改進(jìn)了操作，后面就好了。 還有一種原因可能是多糖類雜質(zhì)殘留，可試試用LiCl沉淀。 |
5樓2011-03-24 22:01:08
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