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[交流]
【求助/交流】RNA抽提260/230比值很小 已有5人參與
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| 用Tirzol抽提組織總RNA，幾次試驗結(jié)果260/280比值和電泳圖的結(jié)果都還不錯，沒有蛋白質(zhì)和DNA的污染，但260/230比值都只在0.5左右，這是什么原因？？？？ |
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小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖交流
dhd997(金幣+8): 謝謝交流 2011-03-25 08:25:14
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖交流
dhd997(金幣+8): 謝謝交流 2011-03-25 08:25:14
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前幾天有人問過類似問題了。 260/230的值，一般不要小于2.0，小的話表明有異硫氰酸胍，β-巰基乙醇或乙醇的殘留。補救的方法是再沉淀一次，然后重復乙醇洗滌的過程。但從我的經(jīng)驗看，后面RNA丟得很多……因此提RNA時就注意了 個人經(jīng)驗，260/230偏小的話，提取時可以改進以下幾點： 1. 加氯仿抽提后取少一點上清，不要貪多。 2.加乙醇洗的時候，多晃幾次，盡量讓RNA沉淀整片懸浮起來（有時候確實浮不起來也沒辦法。） 3.棄乙醇的時候，用槍吸而不是傾倒，倒的話經(jīng)常有液滴留在管壁上，倒不干凈。第一次用藍槍頭吸，可以不完全吸干，免得吸到沉淀；然后短暫離心把殘余酒精甩到管底，看準了用白槍頭盡量吸干凈。RNA量大，被白槍頭弄掉一點也沒關(guān)系。 4.溶解前晾干的時間可以長一點，5分鐘也沒關(guān)系的。標準的做法說是不能晾太久，等沉淀開始變透明就要加水溶解，但是我晾過10分鐘的，后面RNA量也很大。可能量大，雖然有些溶解不了，最后濃度還是高。 可能不完全正確，但是以前我出現(xiàn)過260/230偏小的問題，按上面方法改進了操作，后面就好了。 還有一種原因可能是多糖類雜質(zhì)殘留，可試試用LiCl沉淀。 |
5樓2011-03-24 22:01:08
gaoyang636
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4樓2011-03-24 20:10:26
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