 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 4486 | 回復(fù): 4 | |||
[交流]
【求助/交流】求構(gòu)載體高手 賜教構(gòu)建亞細胞定位載體pCAMBIA1302
|
|
最近要做一個亞細胞定位實驗 載體信息如下： 用于植物轉(zhuǎn)基因的雙元轉(zhuǎn)化載體. 主要用途，以gfp為基礎(chǔ)的分子定位 檢測rbcs的導(dǎo)肽對蛋白定位的作用 插入使用說明： gfp:的閱讀框在酶切位點上的分布如下： NcoI-----BglII----- SpeI CC ATG GtA GAT CTg ACT AGT aaa gga gaa ga ---M---V---D---L---T-- S-- K-- G-- E-- X 由于我的基因ORF內(nèi)部有bgl II位點 所以只能選擇Nco I 和SpeI 但是我的基因閱讀框起始密碼子位置是這樣的 CCATGGG ，加粗部分是我的起始密碼子，本身構(gòu)成了一個NcoI位點，所以我在設(shè)計引物的時候就把CC換成了其他堿基如AT。 但是我現(xiàn)在有一個問題沒有弄清楚，就是從35S啟動子往下算的第一個堿基到我的ATG起始密碼子這一段是不是必須是3的倍數(shù)，由于NcoI本身存在一個ATG，我應(yīng)該怎么設(shè)計引物才會編碼出正確的蛋白呢？ 我今天設(shè)計了一條引物 正向的：圖三，我現(xiàn)在就是不知道這個起始密碼子到35S啟動子末這段是怎么算的。 分子生物學(xué)沒學(xué)到家，哎！ [ Last edited by lxjwishes on 2011-3-2 at 20:48 ] |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗中的趣事：實驗器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗中的趣事：和實驗材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有289人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴謹設(shè)計，解析生命機制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 急，幫看看細胞色素脫氫酶活性測定結(jié)果
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 如何確定有機胺的溴酸鹽已經(jīng)全部轉(zhuǎn)化為有機胺了？請高手賜教！
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 如何定位酶與底物的作用位點
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 293TP細胞
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 求友情贈送白血病細胞株，叩謝啦
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 細胞培養(yǎng)中的問題
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 大腸桿菌感受態(tài)細胞的制備
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 關(guān)于構(gòu)建細胞實驗室的細節(jié)問題
已經(jīng)有35人回復(fù)
- 流式細胞儀技術(shù)
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 中科院上海生化細胞所徐國良組招聘助理研究員
已經(jīng)有181人回復(fù)
- 中科院上海生化細胞所徐國良研究組招聘博士后研究人員
已經(jīng)有51人回復(fù)
- 為什么用胰蛋白酶消化細胞？
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 絲狀真菌菌絲體破碎細胞壁，不要胞內(nèi)酶，求助最簡單的實驗方法。。。
已經(jīng)有18人回復(fù)
» 搶金幣啦！回帖就可以得到:
-
坐標(biāo)上海，誠征女友，非常 著急，私信必回
+1/461
-
西南交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院招收生物醫(yī)學(xué)工程和材料與化工專業(yè)碩士研究生
+1/188
-
澳門科技大學(xué)創(chuàng)新工程學(xué)院誠招博士生
+2/172
-
祈福2026國基面上項目
+5/90
-
Postdoc position in Hangzhou Normal University （陳健翔組博后招聘）
+1/90
-
春天就該逛吃逛吃
+1/79
-
愿遇見你，遇見不止擦肩而過的緣分
+1/73
-
哈爾濱工業(yè)大學(xué)（深圳）-何自開教授團隊誠招化學(xué)工程與技術(shù)專業(yè)博士研究生
+1/35
-
湘潭大學(xué)“過程強化與綠色化工”創(chuàng)新團隊補招2026年秋入學(xué)博士生
+1/34
-
招收材料、化學(xué)類調(diào)劑生，專碩學(xué)碩均可
+1/34
-
巴黎西岱大學(xué)（Université Paris Cité）Fayna MAMMERI 導(dǎo)師尋找CSC公派博士生
+1/22
-
海南師范大學(xué)孫元元老師招生博士，名額1~2個，2026年9月份入學(xué)（光電/光熱催化方向）
+1/16
-
新加坡國立大學(xué)藥學(xué)系化學(xué)生物學(xué)課題組招PhD
+1/10
-
【2026考研調(diào)劑】南方科技大學(xué)-深圳理工大學(xué)聯(lián)培 086000 免疫方向(26.9入學(xué))
+1/9
-
北京航空航天大學(xué)招生微流控與智能打印技術(shù)方向博士研究生
+2/8
-
中國中醫(yī)科學(xué)院中醫(yī)藥健康產(chǎn)業(yè)研究所（江西中醫(yī)藥健康產(chǎn)業(yè)研究院）2026年高層次人才等
+1/6
-
湖北大學(xué)材料學(xué)招26級碩士研究生若干名
+1/6
-
上海交大招收26年級秋季入學(xué)博士生，CET-6過，生物醫(yī)用材料方向（有高分子合成基礎(chǔ)）
+1/5
-
香港中文大學(xué)化學(xué)系吳基培教授招募2026年秋季（2026年8月1日）入學(xué)全獎博士研究生
+1/2
-
招收調(diào)劑生 國家重點實驗室（廣西某師范大學(xué)、B區(qū)）
+1/1
2樓2011-03-02 21:15:16
3樓2011-03-02 21:37:17
|
載體使用信息:--------------------------------------------------------------------------- 用于植物轉(zhuǎn)基因的雙元轉(zhuǎn)化載體. 篩選標(biāo)記:潮霉素 主要用途，以gfp為基礎(chǔ)的分子定位 檢測rbcs的導(dǎo)肽對蛋白定位的作用 插入使用說明： gfp:的閱讀框在酶切位點上的分布如下： NcoI-----BglII----- SpeI CC ATG GtA GAT CTg ACT AGT aaa gga gaa ga ---M---V---D---L---T-- S-- K-- G-- E-- X sp：Ama signal序列： 1 MAKRIASMSS LLLIALLCLS SHLAQAQVL --> GFP的蛋白序列： --> 1 DLTSKGEELF TGVVPILVEL DGDVNGHKFS VSGEGEGDAT YGKLTLKFIC 51 TTGKLPVPWP TLVTTFSYGV QCFSRYPDHM KRHDFFKSAM PEGYVQERTI 101 FFKDDGNYKT RAEVKFEGDT LVNRIELKGI DFKEDGNILG HKLEYNYNSH 151 NVYIMADKQK NGIKANFKTR HNIEDGGVQL ADHYQQNTPI GDGPVLLPDN 201 HYLSTQSALS KDPNEKRDHM VLLEFVTAAG ITHGMDELYK ASHHHHX --> sp_gfp序列： 構(gòu)建方案采取NcoI 和 SpeI連接結(jié)果正確。 --> 1 MAKRIASMSS LLLIALLCLS SHLAQAQVLT SKGEELFTGV VPILVELDGD 51 VNGHKFSVSG EGEGDATYGK LTLKFICTTG KLPVPWPTLV TTFSYGVQCF 101 SRYPDHMKRH DFFKSAMPEG YVQERTIFFK DDGNYKTRAE VKFEGDTLVN 151 RIELKGIDFK EDGNILGHKL EYNYNSHNVY IMADKQKNGI KANFKTRHNI 201 EDGGVQLADH YQQNTPIGDG PVLLPDNHYL STQSALSKDP NEKRDHMVLL 251 EFVTAAGITH GMDELYKASH HHHX --> 載體設(shè)計： AmaspNocI+: CAT CCATGG ATGGCAAAGCGCATAGCCTC 66/58℃ AmaspSpeI-: CTC ACTAGT GAGGACCTGGGCTTGGGC 66/60℃ ----------------------------------------------------------------------------------------------- 附：O.sativa alpha-amylase (alpha-Amy3) gene LOCUS RICAMYA 1317 bp DNA linear PLN 27-APR-1993 DEFINITION O.sativa alpha-amylase (alpha-Amy3) gene, complete cds. ACCESSION M24941 VERSION M24941.1 GI:169774 KEYWORDS alpha-amylase; alpha-amylase 3. SOURCE Oryza sativa (rice) ORGANISM Oryza sativa Eukaryota; Viridiplantae; Streptophyta; Embryophyta; Tracheophyta; Spermatophyta; Magnoliophyta; Liliopsida; Poales; Poaceae; BEP clade; Ehrhartoideae; Oryzeae; Oryza. REFERENCE 1 (bases 1 to 1317) AUTHORS Sutliff,T.D., Huang,N. and Rodriguez,R.L. TITLE Isolation and characterization of a rice alpha-amylase multigene locus JOURNAL Unpublished (1989) COMMENT Original source text: O.stativa (strain cv. M202; EMBL4 library) leaf DNA. Draft entry and computer-readable sequence for [1] kindly submitted by T.D.Sutliff, 26-MAY-1989. FEATURES Location/Qualifiers source 1..1317 /organism="Oryza sativa" /mol_type="genomic DNA" /db_xref="taxon:4530" CDS 1..1317 /note="alpha-amylase precursor (EC 3.2.1.1)" /codon_start=1 /protein_id="AAA33897.1" /db_xref="GI:169775" /translation="MAKRIASMSSLLLIALLCLSSHLAQAQVLFQGFNWESWKKQGGW YNFLHGHVDDIAATGVTHVWLPPPSHSVAPQGYMPGRLYDLDASKYGTGAELRSLIAA FHSKGIKCVADIVINHRCADYKDSRGIYCIFEGGTPDSRLDWGPDMICSDDTQYSNGR GHRDTGADFGAAPDIDHLNTRVQTELSDWLNWLKSDVGFDGWRLDFAKGYSAAVAKTY VDNTDPSFVVAEIWSNMRYDGNGEPSWNQDGDRQELVNWAQAVGGPASAFDFTTKGEL QAAVQGELWRMKDGNGKAPGMIGWLPEKAVTFIDNHDTGSTQNSWPFPSDKVMQGYAY ILTHPGVPCIFYDHVFDWNLKQEISTLAAVRSRNEIHPGSKLKILAAEGDVYVAMIDD KVITKIGTRYDVGNLIPSDFHVVAHGNNYCIWEKSGLRVPAGRHHY" sig_peptide 1..78 /note="alpha-amylase signal peptide" mat_peptide 76..1314 /product="alpha-amylase" ORIGIN Unreported. 1 atggcaaagc gcatagcctc aatgagcagc ctcctcctta tcgccttgct ctgtctgagc 61 tctcacttgg cccaagccca ggtcctcttc caggggttca actgggagtc gtggaagaag 121 cagggcgggt ggtacaactt cctccatggc cacgtcgacg acatcgccgc gaccggtgtc 181 acgcacgtct ggctcccacc gccgtcgcac tccgtcgccc cgcagggata catgccgggc 241 cggctctacg acctggacgc ttccaagtac ggcacggggg cagagctcag gtcgctgatc 301 gccgccttcc acagcaaagg catcaagtgc gtcgccgaca tcgtcatcaa ccaccggtgc 361 gcggattaca aggatagccg tggcatctac tgcattttcg agggtggcac gccggacagc 421 cgcctcgact ggggccccga catgatctgc agcgacgaca cgcagtactc caacggccgc 481 ggtcaccgcg acaccggcgc agacttcggc gcggcgcccg acatcgacca cctcaacacg 541 cgtgtgcaga cagagctgtc cgactggctc aattggctca agtccgacgt cggcttcgac 601 ggctggcgcc tcgacttcgc caagggatac tcggcggccg tcgccaagac gtacgtcgac 661 aacaccgacc cgtccttcgt cgtcgccgag atatggagca acatgcgtta cgacggcaac 721 ggtgagccgt cgtggaacca ggacggtgac cggcaggagc tggtgaactg ggcgcaggcc 781 gtcggtggcc ctgcgtcagc gttcgacttc acgaccaagg gcgagctgca ggcggcggtg 841 caaggtgagc tgtggcggat gaaggacggc aacggcaagg cgccggggat gattggctgg 901 ctgccagaga aggccgtcac cttcatcgac aaccatgaca ctggctccac acagaactca 961 tggccgttcc cctccgacaa ggtcatgcag ggctacgcct acatcctcac acaccctgga 1021 gtaccctgca ttttctacga ccatgtattt gactggaacc tgaagcagga gatcagcaca 1081 ttagctgcag tgagatcaag aaatgagatt catcccggga gcaagctgaa aatccttgct 1141 gctgagggag acgtctatgt cgccatgatc gatgataagg tcataacaaa gattgggaca 1201 cggtatgacg tgggcaactt aatcccgtca gacttccatg tcgttgctca cggcaacaat 1261 tactgcattt gggaaaagag cggtctcaga gttcctgcag ggcggcacca ctattag // |
4樓2011-03-02 22:15:26
5樓2011-03-02 22:16:12
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 lxjwishes 的主題更新
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 一志愿南京理工大學(xué)085701資源與環(huán)境302分求調(diào)劑 +5 | 葵梓衛(wèi)隊 2026-03-18 | 7/350 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 一志愿上海交大生物與醫(yī)藥專碩324分，求調(diào)劑 +4 | jiajunX 2026-03-22 | 4/200 |
|
|
[考研] 263求調(diào)劑 +6 | yqdszhdap－ 2026-03-22 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 306求0703調(diào)劑一志愿華中師范 +6 | 紙魚ly 2026-03-21 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 0703 調(diào)劑 +3 | 我可以上岸的對?/a> 2026-03-16 | 6/300 |
|
|
|
[考研]
 一志愿070300浙大化學(xué)358分，求調(diào)劑！
+4
|
酥酥魚.. 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料與化工085600，總分304，本科有兩篇sci參與，求調(diào)劑 +4 | 幸運的醬醬 2026-03-22 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑一志愿海大，0703化學(xué)學(xué)碩304分，有大創(chuàng)項目，四級已過 +6 | 幸運哩哩 2026-03-22 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 275求調(diào)劑 +6 | shansx 2026-03-22 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 0856材料專碩353求調(diào)劑 +4 | NIFFFfff 2026-03-20 | 4/200 |
|
|
|
[基金申請] 山東省面上項目限額評審 +4 | 石瑞0426 2026-03-19 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 296求調(diào)劑 +4 | www_q 2026-03-20 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | 白QF 2026-03-21 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 346求調(diào)劑[0856] +4 | WayneLim327 2026-03-16 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | Ma_xt 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿重慶大學(xué)085700資源與環(huán)境專碩，總分308求調(diào)劑 +3 | 墨墨漠 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑一志愿南京航空航天大學(xué)289分 +3 | @taotao 2026-03-19 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 生物學(xué)調(diào)劑招人！�。� +3 | 山海天嵐 2026-03-17 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑 +5 | pupcoco 2026-03-17 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑 +3 | 妮妮ninicgb 2026-03-17 | 3/150 |
|