aaron2012

銀蟲(chóng) (初入文壇)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: 576.4
帖子: 43
在線: 23.7小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 1069060

[交流] 【求助/交流】求富含GC的片段的PCR條件

各位大俠，不知道各位在做富含GC片段的時(shí)候有沒(méi)有什么心得，比較好的PCR條件。其他還需要注意的事項(xiàng)。希望得到大家的幫助。謝謝！

回復(fù)此樓

» 猜你喜歡

不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千” 已經(jīng)有0人回復(fù)
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)? 已經(jīng)有57人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI” 已經(jīng)有0人回復(fù)
納米粒度分析已經(jīng)有3人回復(fù)
林科院林化所招收材料與化工專(zhuān)業(yè)碩士，坐標(biāo)南京已經(jīng)有0人回復(fù)
留學(xué)--博士招生已經(jīng)有16人回復(fù)
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限已經(jīng)有4人回復(fù)
邵陽(yáng)學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑已經(jīng)有0人回復(fù)
湖北師范大學(xué)招調(diào)劑啦已經(jīng)有3人回復(fù)

» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:

一種比較詳細(xì)的PCR技術(shù) 已經(jīng)有10人回復(fù)
高GC含量基因片段PCR問(wèn)題已經(jīng)有13人回復(fù)
GC含量很高的模板怎么能順利PCR？已經(jīng)有4人回復(fù)
1.5kb的 PCR目的序列GC含量高達(dá)67%，引物Tm值達(dá)90℃，怎么P比較好？已經(jīng)有16人回復(fù)
【專(zhuān)題】PCR實(shí)驗(yàn)技術(shù)指南已經(jīng)有535人回復(fù)
微生物學(xué)考研資料1(沈萍版同步）免幣分享已經(jīng)有67人回復(fù)

» 搶金幣啦！回帖就可以得到:

查看全部散金貼

1樓 2011-03-10 14:51:54

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

bijing_1111

新蟲(chóng) (初入文壇)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: 160.4
帖子: 15
在線: 8.5小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 1149771

★
aaron2012(金幣+3): 2011-03-10 15:49:40
最?lèi)?ài)花詩(shī)雨(金幣+1): 鼓勵(lì)新蟲(chóng)交流~~ 2011-03-10 17:12:33

做過(guò)GC含量70%多的片段擴(kuò)增，用了GC Buffer（好像是TAKARA的），參照說(shuō)明書(shū)的條件，體系沒(méi)有什么特別，主要是變性時(shí)間不要太長(zhǎng)，一分鐘就夠了，GC Buffer裂解能力很強(qiáng)，循環(huán)中10s變性就夠了。酶根據(jù)你的片段要求選擇，沒(méi)要求普通tag酶就ok。

贊一下(1人)

回復(fù)此樓

2樓2011-03-10 15:14:24

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

101202139

銅蟲(chóng) (小有名氣)

應(yīng)助: 3 (幼兒園)
金幣: 135.9
帖子: 171
在線: 172.1小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 1161666

aaron2012(金幣+1): 2011-03-10 15:49:31

最好加入5%-10%的DMSO（二甲基亞砜）

贊一下

回復(fù)此樓

3樓2011-03-10 15:40:31

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

aaron2012

銀蟲(chóng) (初入文壇)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: 576.4
帖子: 43
在線: 23.7小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 1069060

引用回帖:

Originally posted by bijing_1111 at 2011-03-10 15:14:24:
做過(guò)GC含量70%多的片段擴(kuò)增，用了GC Buffer（好像是TAKARA的），參照說(shuō)明書(shū)的條件，體系沒(méi)有什么特別，主要是變性時(shí)間不要太長(zhǎng)，一分鐘就夠了，GC Buffer裂解能力很強(qiáng)，循環(huán)中10s變性就夠了。酶根據(jù)你的片段要求選 ...

你說(shuō)的變性時(shí)間是指最開(kāi)始的那個(gè)變性時(shí)間，還是循環(huán)里的變形時(shí)間？
我這陣子也有10×GCEnhencer。你們?cè)谧龅臅r(shí)候一般加多少啊？

贊一下

回復(fù)此樓

4樓2011-03-10 15:48:15

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

aaron2012

銀蟲(chóng) (初入文壇)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: 576.4
帖子: 43
在線: 23.7小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 1069060

引用回帖:

Originally posted by 101202139 at 2011-03-10 15:40:31:
最好加入5%-10%的DMSO（二甲基亞砜）

看有關(guān)文獻(xiàn) 說(shuō)退火溫度對(duì)其影響也很大今天有加DMSO還是沒(méi)有帶出來(lái)

贊一下

回復(fù)此樓

5樓2011-03-10 15:49:21

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

yabxxh

木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

MolEPI: 14
應(yīng)助: 22 (小學(xué)生)
貴賓: 0.005
金幣: 2238
帖子: 465
在線: 88.6小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 157001

★ ★
aaron2012(金幣+3): 2011-03-10 16:26:30
amisking(金幣+2): 鼓勵(lì)發(fā)帖交流。 2011-03-10 19:34:59

呵呵，我是克隆過(guò)一段人的基因，GC含量非常高，用的是TAKARA的primerstar hs熱啟動(dòng)版，gc buffer II，注意片段長(zhǎng)度，退火10s足夠，應(yīng)該不是很難得到。真不行前面加一段60度得降落PCR（約5個(gè)循環(huán)），后面TM值擴(kuò)增。好運(yùn)

贊一下(1人)

回復(fù)此樓

6樓2011-03-10 15:50:55

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

aaron2012

銀蟲(chóng) (初入文壇)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: 576.4
帖子: 43
在線: 23.7小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 1069060

引用回帖:

Originally posted by yabxxh at 2011-03-10 15:50:55:
呵呵，我是克隆過(guò)一段人的基因，GC含量非常高，用的是TAKARA的primerstar hs熱啟動(dòng)版，gc buffer II，注意片段長(zhǎng)度，退火10s足夠，應(yīng)該不是很難得到。真不行前面加一段60度得降落PCR（約5個(gè)循環(huán)），后面TM值擴(kuò)增。 ...

請(qǐng)問(wèn)你用的簡(jiǎn)并引物還是特異引物啊能不能把你具體的PCR條件告訴我一下謝謝

贊一下

回復(fù)此樓

7樓2011-03-10 16:26:19

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

bijing_1111

新蟲(chóng) (初入文壇)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: 160.4
帖子: 15
在線: 8.5小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 1149771

aaron2012(金幣+1): 2011-03-12 08:32:30
aaron2012(金幣+1): 2011-03-12 08:35:06

引用回帖:

Originally posted by aaron2012 at 2011-03-10 15:48:15:
你說(shuō)的變性時(shí)間是指最開(kāi)始的那個(gè)變性時(shí)間，還是循環(huán)里的變形時(shí)間？
我這陣子也有10×GCEnhencer。你們?cè)谧龅臅r(shí)候一般加多少啊？

預(yù)變性1min，循環(huán)中10s。Buffer終濃度都是1×的，我用過(guò)的GC Buffer是2×GC Buffer 2，好像是TAKARA的。

贊一下

回復(fù)此樓

8樓2011-03-11 09:27:33

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

yabxxh

木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

MolEPI: 14
應(yīng)助: 22 (小學(xué)生)
貴賓: 0.005
金幣: 2238
帖子: 465
在線: 88.6小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 157001

aaron2012(金幣+1): 2011-03-12 08:35:14

引用回帖:

呵呵，我用的是PCR特異引物，你要用兼并引物的話，要注意Tm算法。我的條件不一定適合你的，就是普通的兩步法，在第一步后面加上一步95度1min，效果可能會(huì)好點(diǎn)，goodluck

贊一下

回復(fù)此樓

9樓2011-03-11 09:53:19

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

wqj1988926

金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

MolEPI: 1
應(yīng)助: 40 (小學(xué)生)
金幣: 1222
帖子: 929
在線: 225.6小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 1156883

提高退火溫度
http://old.biovip.com/content/20050513/13054.htm
可以看看這個(gè)

贊一下

回復(fù)此樓

10樓2011-03-11 11:23:00

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

fywjp

木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

應(yīng)助: 3 (幼兒園)
金幣: 6334.5
帖子: 664
在線: 111小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 825701

相關(guān)文獻(xiàn)有很多，去年AC就有一篇啊，上網(wǎng)查一下就行了

贊一下

回復(fù)此樓

11樓2011-03-11 14:18:33

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

最具人氣熱帖推薦 [查看全部]	作者	回/看	最后發(fā)表

[考研] 本2一志愿C9-333分，材料科學(xué)與工程，求調(diào)劑 +3	升升不降 2026-03-31	3/150	2026-03-31 06:30 by wxiongid
[考研] 370求調(diào)劑 +3	080700調(diào)劑 2026-03-30	3/150	2026-03-31 01:09 by A_Zhe
[考研] 303求調(diào)劑 +7	DLkz1314. 2026-03-30	7/350	2026-03-30 21:07 by peike
[考研] 一志愿華中師范化學(xué)332分求調(diào)劑 +3	Lyy930824@ 2026-03-29	3/150	2026-03-30 20:15 by DHUSHUAI
[考研] 359求調(diào)劑 +5	王了個(gè)楠 2026-03-25	5/250	2026-03-30 19:36 by 源_2020
[考研] 0703化學(xué)321分求調(diào)劑 +10	三dd. 2026-03-30	11/550	2026-03-30 19:24 by markhwc
[考研] 085600 材料與化工 329分求調(diào)劑 +18	Mr. Z 2026-03-25	19/950	2026-03-30 19:01 by Wang200018
[考研] 262求調(diào)劑 +4	ZZ..000 2026-03-30	4/200	2026-03-30 15:57 by wangjy2002
[考研] 0703本科鄭州大學(xué)求調(diào)劑 +7	nhj_ 2026-03-25	7/350	2026-03-30 12:44 by fangnagu
[考研] 332求調(diào)劑 +6	Lyy930824@ 2026-03-29	6/300	2026-03-30 10:53 by 1172367218
[考研] 一志愿中南大學(xué)化學(xué)0703總分337求調(diào)劑 +6	niko- 2026-03-27	6/300	2026-03-30 10:25 by herarysara
[考研] 298求調(diào)劑 +3	種圣賜 2026-03-29	3/150	2026-03-29 12:06 by longlotian
[考研] 315求調(diào)劑 +4	akie... 2026-03-28	5/250	2026-03-28 21:05 by zhq0425
[考研] 一志愿南京航空航天大學(xué)材料學(xué)碩求調(diào)劑 +3	@taotao 2026-03-28	3/150	2026-03-28 10:26 by JourneyLucky
[考研] 081200-314 +3	LILIQQ 2026-03-27	4/200	2026-03-28 09:41 by 保護(hù)地球你我做?/a>
[考研] 286求調(diào)劑 +4	丟掉懶惰 2026-03-27	7/350	2026-03-28 08:07 by baoball
[考研] 272求調(diào)劑 +7	腳滑的守法公民 2026-03-27	7/350	2026-03-27 17:23 by laoshidan
[考研] 292求調(diào)劑 +4	求求了收下我吧?/a> 2026-03-26	4/200	2026-03-27 10:37 by zhshch
[考研] 081200-11408-276學(xué)碩求調(diào)劑 +4	崔wj 2026-03-26	4/200	2026-03-27 08:04 by chemisry
[考研] 085602 289分求調(diào)劑 +8	WWW西西弗斯 2026-03-24	8/400	2026-03-26 16:33 by 不吃魚(yú)的貓