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[交流]
【求助/交流】納豆激酶制備過(guò)程中蛋白含量測(cè)定結(jié)果令我很費(fèi)解，希望各位大蝦多多指教?
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我是通過(guò)液體發(fā)酵制備而得的樣品，離心得到上清后，硫酸銨鹽析樣品得到沉淀蛋白，透析后冷凍干燥得到蛋白樣品，采用考馬斯亮藍(lán)染色法測(cè)得蛋白含量都為8-10%左右，那其余90%是什么呢?令我很費(fèi)解，之后我以為方法上是不是誤差太大，采用BCA試劑盒來(lái)測(cè)蛋白含量，同時(shí)測(cè)定試劑盒所帶的BSA（2mg/ml）標(biāo)準(zhǔn)品，根據(jù)標(biāo)曲算的我bsa蛋白濃度為1.9701mg/ml，相差不是很大，而我的納豆激酶樣品所測(cè)結(jié)果仍然為8-10%之間希望各位大蝦給給意見(jiàn)，謝謝了�。。� |
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 生工檢測(cè)理論與實(shí)務(wù) |
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2樓2011-03-22 10:33:57
3樓2011-03-22 10:54:53
4樓2011-03-22 16:42:14
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本帖內(nèi)容被屏蔽 |
5樓2011-03-22 17:03:39
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silicare(金幣+2): 問(wèn)題提的好，同問(wèn) 2011-03-22 18:47:56
silicare(金幣+2): 問(wèn)題提的好，同問(wèn) 2011-03-22 18:47:56
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6樓2011-03-22 17:07:46
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不好意思，怪我沒(méi)說(shuō)清楚 是這樣的：我之前采用考馬斯亮藍(lán)蛋白試劑盒測(cè)我所得的蛋白樣本，一共有10批樣本，通過(guò)bsa標(biāo)曲計(jì)算所得的蛋白量占樣品總重的8~10%.但是那其余的90%是什么呢？按理說(shuō)硫酸銨鹽析大部分蛋白都下來(lái)了吧，但是為什么那么低呢？ 我當(dāng)時(shí)覺(jué)得是不是方法有問(wèn)題，用BCA法萊印證一下，這也是我為什么要測(cè)BCA試劑盒里面附帶的BSA蛋白濃度的原因。 可是那90%我怎么想也想不出，它到底是啥 謝謝各位老師和同學(xué)了。哪怕給那么一小點(diǎn)的指引我都感激不盡，真的 謝謝 |
7樓2011-03-23 10:34:58
8樓2011-03-24 17:25:24
9樓2011-03-27 09:54:13
10樓2011-03-28 15:16:37
11樓2011-03-28 15:17:07
★
小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖
小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖
| 是納豆發(fā)酵過(guò)程中產(chǎn)生的多聚谷氨酸,即PGA。我的信箱：dongchao8605@sina.com。我一直在做納豆激酶方面的工作，可以聯(lián)系。 |
12樓2011-05-30 09:38:26
conroc
金蟲(chóng) (正式寫手)
- 應(yīng)助: 33 (小學(xué)生)
- 金幣: 1269
- 帖子: 426
- 在線: 201.9小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1078186
★
小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖
小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖
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很是有感觸，最近用考馬斯和lowery法分別測(cè)了下 蛋白含量，都會(huì)有這個(gè)問(wèn)題，測(cè)定的蛋白含量偏低，我們的菌也是聯(lián)產(chǎn)聚谷氨酸的，我猜測(cè)有可能是這個(gè)原因，我是做納豆激酶的分離純化的，在最后純化后，蛋白含量很低，不能用冷凍干燥稱重量，只能選擇用考馬斯或lowery法測(cè)定，很是無(wú)語(yǔ)，測(cè)的少了吧，比活太高，老板說(shuō)不可信。我又用納豆激酶表品，在日本viko公司買的，做表品，測(cè)出來(lái)蛋白含量很高，結(jié)果比活太小，老板說(shuō)，要是這樣，你純化了，沒(méi)意義。我很是無(wú)語(yǔ)。。。我猜原因應(yīng)該是納豆激酶和G250結(jié)合不緊密，所以不容易測(cè)量。。。。 |
13樓2011-09-22 15:49:57
14樓2012-03-29 14:32:38
15樓2012-08-30 11:25:50
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