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321wangke321金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[交流]
【求助/交流】求PCR條帶微弱的原因和解決方法 已有9人參與
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1、大家?guī)兔Ψ治鱿略颍瑸槭裁催@么淡? 2、看看怎樣讓條帶更加亮些？25微升體系：17微升超純水，2.5微升buffer，2微升dNTP，1微升上游引物，1微升下游引物，0.5微升Taq酶。引物濃度是10毫摩爾每微升。 3、能不能把條帶切下來(lái)再P一次？ [ Last edited by 321wangke321 on 2011-3-25 at 19:08 ] |
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是蠻弱的，不知道樓主是用的什么模板，是質(zhì)粒還是基因組DNA，不過(guò)我估計(jì)應(yīng)該是基因組，質(zhì)粒一般不會(huì)那么弱。可以試著考慮用擴(kuò)增效率高的酶看，你是用的哪款酶？或者建議樓主模板和引物都加倍，酶的量可以少點(diǎn)，0.3或者0。2就夠了，酶濃度高了的話甘油會(huì)影響活性的。一次P倆管，循環(huán)數(shù)可以適當(dāng)?shù)募?個(gè)。再試一試，如果還不好，就是可能引物太長(zhǎng)了？模板質(zhì)量不好？退火溫度不適合？都有可能了。 不過(guò)樓主的帶還是P出來(lái)了，應(yīng)該沒(méi)問(wèn)題的，循環(huán)數(shù)適當(dāng)放大。如果用的高保真酶的話，可以切下來(lái)做模板再P。 還有就是樓主的MARKER也不是很亮~是加少了還是曝光度不夠？ [ Last edited by 阿修羅Axuro on 2011-3-25 at 22:32 ] |
10樓2011-03-25 22:29:51
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