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[交流]
【求助/交流】T-DNA全長約10000bp能否轉(zhuǎn)入植物基因組。
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最近在構(gòu)建一個載體，最終T-DNA的長度要達到1w bp。請問，這么長的片段，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)能否順利的轉(zhuǎn)入植物基因組。聽說T-DNA太長的話不好全部轉(zhuǎn)入，有沒有哪位同學(xué)做過這方面的實驗。給點建議！如果盲目的構(gòu)建將來卻轉(zhuǎn)不進去，豈不是很悲催。 或者， 哪位同學(xué)給推薦一個表達載體（質(zhì)粒），要求：1，質(zhì)粒較小，目前本人操作的兩個載體（pbi121和pksb）都是1.5w bp左右，這也是導(dǎo)致最終T-DNA較長的一個直接原因。2，質(zhì)粒沒有選擇標(biāo)記/抗性標(biāo)記基因，或者選擇標(biāo)記比較容易切除！如果能找到這樣的載體，T-DNA的最終長度會減少很多。 另外還有一個酶切連接的問題。需要在載體中雙酶切切去一個片段，然后讓剩下的載體大片段自連�，F(xiàn)在想了兩個方案：1，用平末端連接。2，也是聽說平末端比較難連接，試圖從該載體中隨便pcr擴增一個片段，在上下游引物兩端加上我雙酶切的那兩個酶，然后再和上述的載體大片段連接。覺得第二個辦法好笨啊。請問，平末端真的很難操作嗎？有做過的同學(xué)給點建議吧。在此先謝過了，問題好像比較多啊，菜鳥！我就是一直實驗小菜鳥。各位，包含~~ [ Last edited by yehuanren on 2011-3-30 at 01:31 ] |
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7樓2011-03-30 15:42:39
2樓2011-03-30 02:13:49
3樓2011-03-30 09:38:20
1949stone
榮譽版主 (知名作家)
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4樓2011-03-30 12:16:21
8樓2011-03-30 16:36:28
9樓2011-03-30 16:39:53
11樓2011-03-30 16:51:04
★ ★ ★ ★
yehuanren(金幣+1):謝謝參與
yehuanren(金幣+5): 謝謝您，我明天提完質(zhì)粒就往下做，先試試再說吧，百聞不如一試。呵呵 2011-03-30 20:46:06
dhd997(金幣+3): good 2011-03-31 08:18:32
yehuanren(金幣+1):謝謝參與
yehuanren(金幣+5): 謝謝您，我明天提完質(zhì)粒就往下做，先試試再說吧，百聞不如一試。呵呵 2011-03-30 20:46:06
dhd997(金幣+3): good 2011-03-31 08:18:32
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不知道LZ這個T-DNA是有特殊目的還是怎么的？ 如果是有特殊目的非要這么大片段那在片段上就沒什么辦法了， 載體方面可以換換其他的載體，不過一般做植物轉(zhuǎn)化的載體都不怎么小，除了一些打基因槍這類的載體，但這些并不適合做普通的轉(zhuǎn)化。 另外關(guān)于連接的問題，其實平末端與粘性末端在連接上的成功率個人覺得差別不大，感覺平末端連接困難的原因只是因為載體自連的會比較多，這個只需要在做連接的時候加大片段的量就沒多大問題了。但是如果是用平末端連接的話，有的時候往往需要考慮方向的正反。 實際上很多東西做起來并沒有那么麻煩。LZ試試就知道了  |
12樓2011-03-30 19:12:33
13樓2011-03-30 20:55:16
18樓2011-03-30 21:18:27
19樓2011-03-30 21:21:19
話你片段的大小就是隨你自己控制了。 20樓2011-03-30 21:31:45
21樓2011-03-31 17:16:43
★ ★ ★
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖
dhd997(金幣+2): 鼓勵交流 2011-05-17 08:40:29
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖
dhd997(金幣+2): 鼓勵交流 2011-05-17 08:40:29
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本帖內(nèi)容被屏蔽 |
22樓2011-05-17 00:08:36
23樓2012-05-22 10:41:33
簡單回復(fù)
2011-03-30 12:42
回復(fù)
yehuanren(金幣+1):謝謝參與
香菱兒6樓
2011-03-30 13:59
回復(fù)
yehuanren(金幣+1):謝謝參與
。。。。。。 [ Last edited by 香菱兒 on 2011-3-30 at 18:14 ]
牛哥哥10樓
2011-03-30 16:43
回復(fù)
yehuanren(金幣+1):謝謝參與
媛媛122314樓
2011-03-30 20:59
回復(fù)
yehuanren(金幣+1):謝謝參與
媛媛122315樓
2011-03-30 21:01
回復(fù)
dhd997: 連續(xù)頂貼會被視為惡意灌水，下次注意啦。專業(yè)不懂的話，歡迎交流，僅僅為一個金幣不值得，求助帖子最好不要純表，有規(guī)定的 2011-03-31 08:20:26
媛媛122316樓
2011-03-30 21:03
回復(fù)
91088397417樓
2011-03-30 21:17
回復(fù)
yehuanren(金幣+1):謝謝參與
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