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1樓 2011-04-08 15:09:20

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jhu132llh

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大洪

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性別: GG
專業(yè): 生殖生物學
管轄: 動植物

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小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖交流
amisking(金幣+2, EPI+1): 鼓勵發(fā)帖交流。 2011-04-08 19:59:03

都差不多
國內可能一般冰凍切片機用的相對要少一點
冰凍切片雖然快速，省事，并且對抗原保護要好一些
在免疫組化這一塊相對用途可能會廣一點
但是對制片技術要求比較高
要是能切出來一手賊漂亮的冰凍切片話
估計出國找工作也會有人要的
我們實驗室就有一臺萊卡的
很多人不會用
很多人就會使用，卻切不出來漂亮的滿足自己實驗的合適的片子。

所以，還是石蠟切片機要多一些
石蠟切片還是比較容易能切出來一些好片子的
組織形態(tài)標準漂亮
尤其是用于組織學觀察等用途可能要廣一些
但是要費事一些

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2樓2011-04-08 17:39:16

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nmglhl

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3樓2011-04-08 17:41:54

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jhu132llh

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看天(金幣+2): 熱心了！ 2011-04-09 01:55:06

引用回帖:

Originally posted by jhu132llh at 2011-04-08 17:39:16:
都差不多
國內可能一般冰凍切片機用的相對要少一點
冰凍切片雖然快速，省事，并且對抗原保護要好一些
在免疫組化這一塊相對用途可能會廣一點
但是對制片技術要求比較高
要是能切出來一手賊漂亮的冰凍切片話
...

應要求
在簡述一下石蠟切片機和冰凍切片的原理及其應用
一.石蠟切片技術
石蠟切片法包括取材、固定、洗滌和脫水、透明、浸蠟、包埋、切片與粘片、脫蠟、染色、脫水、透明、封片等步驟。一般的組織從取材固定到封片制成玻片標本需要數(shù)日，但標本可以長期保存使用，為永久性顯微玻片標本。
一般的步驟大家都知道，就不多說了，值說幾個注意的地方
1.固定組織要在方便的前提下盡可能的小點，固定液根據(jù)組織來源不同要選合適的。固定液的用量通常為材料塊的20倍左右，固定時間則根據(jù)材料塊的大小及松密程度以及固定液的穿透速度而定，可以從1小時至數(shù)天，通常為數(shù)小時至24小時。純酒精可固定肝糖而能溶解脂肪，甲醛能固定一般組織，但溶解肝糖和色素；單一固定液不能固定細胞中的所有成分；混合固定液可以互補不足，常用的混合固定液有Bouin氏液、Zenker氏液、FAA液、Carnoy氏液、SuSa液（配方見有關技術書籍）。
2.脫水要防止脫水過度引物組織萎縮。如不能及時進行各級脫水，材料可以放在70％酒精中保存，因高濃度酒精易使組織收縮硬化，不宜處理過久。
3.透明劑的浸漬時間則要根據(jù)組織材料塊大小及屬于囊腔抑或實質器官而定。如果透明時間過短，則透明不徹底，石蠟難于浸入組織；透明時間過長，則組織硬化變脆，就不易切出完整切片，最長為數(shù)小時。
4.切片厚度，切片過薄和過厚均會影響接下來的實驗，過薄了貼片與烤片不好做，有可能染色結果也不全；過厚了，可能染色會很難看，或者通透的時候很麻煩。
5.抗原修復，石蠟切片的最大不好的地方就是要進行抗原修復，一個修復不好，最好免疫染色就不漂亮，這個是很多人選擇冰凍切片的最大原因，因為有可能你的某個抗原的修復優(yōu)化會在這里花去你很多的時間。
二. 石蠟切片技術優(yōu)缺點
石蠟切片（paraffin section）組織學常規(guī)制片技術中最為廣泛應用的方法。石蠟切片不僅用于觀察正常細胞組織的形態(tài)結構，也是病理學和法醫(yī)學等學科用以研究、觀察及判斷細胞組織的形態(tài)變化的主要方法，而且也已相當廣泛地用于其他許多學科領域的研究中。教學中，光鏡下觀察切片標本多數(shù)是石蠟切片法制備的。
而在免疫組化這一塊上。冰凍切片手續(xù)簡便，制片過程中抗原活性丟失少，但組織細胞形態(tài)較差；石蠟切片步驟繁多，制片中抗原活性有所減低，但組織細胞形態(tài)清晰，是免疫組織化學常規(guī)制備切片方法之一。一般石蠟包埋的組織切片用于檢測胞漿或核內的抗原，不宜做表面抗原染色。
但是，石蠟包埋組織流式細胞儀DNA含量分析是石蠟包埋組織切片與流式細胞術結合使用來測量DNA含量及倍體分析，這一結合是流式細胞儀在臨床應用中，特別是在腫瘤研究方面開拓了新的研究途徑。目前已可測量細胞的大小、體積、DNA含量、DNA合成速率、RNA含量、表面抗原、染色體等。由于制備樣品技術的原因，過去許多流式分析資料僅限于采用新鮮組織標本，而現(xiàn)在可以分析石蠟包埋組織切片制備分散細胞懸液技術來進行DNA含量的檢測，從組織切片中能獲得足夠數(shù)量的單個細胞，且與新鮮組織分離獲得的單個細胞在形態(tài)及DNA含量組方圖上均極為相似。

三.冰凍切片技術
冰凍切片是一種在低溫條件下使組織快速冷卻到一定硬度，然后進行切片的方法。因其制作過程較石蠟切片快捷、簡便，而多應用于手術中的快速病理診斷。冰凍切片的種類較多，有低溫恒冷箱冰凍切片法，二氧化碳冰凍切片法，甲醇循環(huán)制冷冰凍切片法等。這些方法，隨著時代的變遷，科技的發(fā)展，許多年前被認為是非常重要的技術，現(xiàn)在也逐步被淘汰了。當然有些技術，如低溫恒冷箱冰凍切片法，正在受到青睞。
一般的步驟大家都知道，也不多說了
1.取材：組織盡可能新鮮、驟冷愈快愈好，才能避免冰晶。而冰晶會對細胞產(chǎn)生無法彌補的破壞，直接影響免疫組化結果。所以，一般采用把組織懸于液氮臨界面上10-20秒后將組織投入液氮中驟冷。
2.恒冷箱溫度
　　一般在冷凍后10分鐘，到接近冷室溫度時再切，一般組織在－15～－20℃切片最易成功。每種組織有其合適的切片溫度、刀的溫度和冷室溫度。
3.切片
由于冰凍切片的組織新鮮及驟冷包埋在OCT中，其實組織本身沒有滲透入包埋劑，所以組織本身還是比較軟的。這就對切片的技術要求比較高了，要求刀片鋒利，刀口角度良好，組織溫度與單片溫度與箱體溫度差合適；要求切片時進刀速度和力度都要把握好才能切出一張令人滿意的片子的。而抗卷板的前緣與刀面須有足夠的距離，使切片平滑通過�？咕戆迓愿哂诘睹娴淖罡唿c，得可憑經(jīng)驗調整刀對組織的角度。
四.冰凍切片的優(yōu)缺點
（一）優(yōu)點：
　　1．簡便，可以不需要對組織固定、脫水、透明、包埋等手續(xù)即可進行切片，減少了一些中間環(huán)節(jié)。2．快速，用時短。3．組織變化不大。4．能很好保存脂肪，類脂等成分。5．能夠比較完好地保存各種抗原活性及酶類，特別是對于那些對有機溶劑或熱的溫度耐受能力較差的細胞膜表面抗原和水解酶保存較好。
（二）缺點：
　　1．不容易做連續(xù)切片。2．切取的組織不能過大，組織過大不容易凍結或者組織凍結不均，影響切片及染色效果。3．不容易制作較薄的切片。4．組織塊在凍結過程中容易產(chǎn)生水的結晶而影響細胞的形態(tài)結構及抗原物質的定位，并且組織結構也不如石蠟切片清晰。

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4樓2011-04-08 19:57:47

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nmglhl

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5樓2011-04-11 12:04:09

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z6061658

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lifming

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wizardfan: 金幣+1, 謝謝參與 2013-01-20 09:24:40

的確在做組織形態(tài)學上，冰凍切片沒有石蠟切片效果好，今天剛做完，正在懊惱中。切出來的片子的組織形態(tài)學不易辨認。

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7樓2013-01-20 00:43:21

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成亮

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石蠟切片二甲苯味道太難聞了，每次做完都很不舒服

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假如你要做免疫組織化學的話，冰凍切片確實很好，有很好的抗原保護性，做出來的結果也比較可信些；如果就是主要分析細胞組織形態(tài)的話，就一般的石蠟切片就可以了，萊卡的切片機確實很好用哈，嘿嘿，做個廣告。

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haisongzhou

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4樓: Originally posted by jhu132llh at 2011-04-08 19:57:47
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石蠟切片法包括取材、固定、洗滌和脫水、透明、浸蠟、包埋、切片與粘片、脫蠟、染色、脫水、透明、封片等步驟。一般的組織從取材固定 ...

你太牛了，我正想提這個問題呢。你對我的幫助太大了。

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成功就像用木槌敲擊一個懸掛的鐵球，堅持不懈，終有一天鐵球會被敲動的。

10樓2013-11-30 16:56:23

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