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1樓 2011-04-08 15:09:20

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nmglhl

禁蟲 (著名寫手)

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5樓2011-04-11 12:04:09

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jhu132llh

榮譽版主 (知名作家)

大洪

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蟲號: 1095066
注冊: 2010-09-10
性別: GG
專業(yè): 生殖生物學(xué)
管轄: 動植物

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小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖交流
amisking(金幣+2, EPI+1): 鼓勵發(fā)帖交流。 2011-04-08 19:59:03

都差不多
國內(nèi)可能一般冰凍切片機用的相對要少一點
冰凍切片雖然快速，省事，并且對抗原保護(hù)要好一些
在免疫組化這一塊相對用途可能會廣一點
但是對制片技術(shù)要求比較高
要是能切出來一手賊漂亮的冰凍切片話
估計出國找工作也會有人要的
我們實驗室就有一臺萊卡的
很多人不會用
很多人就會使用，卻切不出來漂亮的滿足自己實驗的合適的片子。

所以，還是石蠟切片機要多一些
石蠟切片還是比較容易能切出來一些好片子的
組織形態(tài)標(biāo)準(zhǔn)漂亮
尤其是用于組織學(xué)觀察等用途可能要廣一些
但是要費事一些

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2樓2011-04-08 17:39:16

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nmglhl

禁蟲 (著名寫手)

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3樓2011-04-08 17:41:54

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jhu132llh

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大洪

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小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖交流
看天(金幣+2): 熱心了！ 2011-04-09 01:55:06

引用回帖:

Originally posted by jhu132llh at 2011-04-08 17:39:16:
都差不多
國內(nèi)可能一般冰凍切片機用的相對要少一點
冰凍切片雖然快速，省事，并且對抗原保護(hù)要好一些
在免疫組化這一塊相對用途可能會廣一點
但是對制片技術(shù)要求比較高
要是能切出來一手賊漂亮的冰凍切片話
...

應(yīng)要求
在簡述一下石蠟切片機和冰凍切片的原理及其應(yīng)用
一.石蠟切片技術(shù)
石蠟切片法包括取材、固定、洗滌和脫水、透明、浸蠟、包埋、切片與粘片、脫蠟、染色、脫水、透明、封片等步驟。一般的組織從取材固定到封片制成玻片標(biāo)本需要數(shù)日，但標(biāo)本可以長期保存使用，為永久性顯微玻片標(biāo)本。
一般的步驟大家都知道，就不多說了，值說幾個注意的地方
1.固定組織要在方便的前提下盡可能的小點，固定液根據(jù)組織來源不同要選合適的。固定液的用量通常為材料塊的20倍左右，固定時間則根據(jù)材料塊的大小及松密程度以及固定液的穿透速度而定，可以從1小時至數(shù)天，通常為數(shù)小時至24小時。純酒精可固定肝糖而能溶解脂肪，甲醛能固定一般組織，但溶解肝糖和色素；單一固定液不能固定細(xì)胞中的所有成分；混合固定液可以互補不足，常用的混合固定液有Bouin氏液、Zenker氏液、FAA液、Carnoy氏液、SuSa液（配方見有關(guān)技術(shù)書籍）。
2.脫水要防止脫水過度引物組織萎縮。如不能及時進(jìn)行各級脫水，材料可以放在70％酒精中保存，因高濃度酒精易使組織收縮硬化，不宜處理過久。
3.透明劑的浸漬時間則要根據(jù)組織材料塊大小及屬于囊腔抑或?qū)嵸|(zhì)器官而定。如果透明時間過短，則透明不徹底，石蠟難于浸入組織；透明時間過長，則組織硬化變脆，就不易切出完整切片，最長為數(shù)小時。
4.切片厚度，切片過薄和過厚均會影響接下來的實驗，過薄了貼片與烤片不好做，有可能染色結(jié)果也不全；過厚了，可能染色會很難看，或者通透的時候很麻煩。
5.抗原修復(fù)，石蠟切片的最大不好的地方就是要進(jìn)行抗原修復(fù)，一個修復(fù)不好，最好免疫染色就不漂亮，這個是很多人選擇冰凍切片的最大原因，因為有可能你的某個抗原的修復(fù)優(yōu)化會在這里花去你很多的時間。
二. 石蠟切片技術(shù)優(yōu)缺點
石蠟切片（paraffin section）組織學(xué)常規(guī)制片技術(shù)中最為廣泛應(yīng)用的方法。石蠟切片不僅用于觀察正常細(xì)胞組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)，也是病理學(xué)和法醫(yī)學(xué)等學(xué)科用以研究、觀察及判斷細(xì)胞組織的形態(tài)變化的主要方法，而且也已相當(dāng)廣泛地用于其他許多學(xué)科領(lǐng)域的研究中。教學(xué)中，光鏡下觀察切片標(biāo)本多數(shù)是石蠟切片法制備的。
而在免疫組化這一塊上。冰凍切片手續(xù)簡便，制片過程中抗原活性丟失少，但組織細(xì)胞形態(tài)較差；石蠟切片步驟繁多，制片中抗原活性有所減低，但組織細(xì)胞形態(tài)清晰，是免疫組織化學(xué)常規(guī)制備切片方法之一。一般石蠟包埋的組織切片用于檢測胞漿或核內(nèi)的抗原，不宜做表面抗原染色。
但是，石蠟包埋組織流式細(xì)胞儀DNA含量分析是石蠟包埋組織切片與流式細(xì)胞術(shù)結(jié)合使用來測量DNA含量及倍體分析，這一結(jié)合是流式細(xì)胞儀在臨床應(yīng)用中，特別是在腫瘤研究方面開拓了新的研究途徑。目前已可測量細(xì)胞的大小、體積、DNA含量、DNA合成速率、RNA含量、表面抗原、染色體等。由于制備樣品技術(shù)的原因，過去許多流式分析資料僅限于采用新鮮組織標(biāo)本，而現(xiàn)在可以分析石蠟包埋組織切片制備分散細(xì)胞懸液技術(shù)來進(jìn)行DNA含量的檢測，從組織切片中能獲得足夠數(shù)量的單個細(xì)胞，且與新鮮組織分離獲得的單個細(xì)胞在形態(tài)及DNA含量組方圖上均極為相似。

三.冰凍切片技術(shù)
冰凍切片是一種在低溫條件下使組織快速冷卻到一定硬度，然后進(jìn)行切片的方法。因其制作過程較石蠟切片快捷、簡便，而多應(yīng)用于手術(shù)中的快速病理診斷。冰凍切片的種類較多，有低溫恒冷箱冰凍切片法，二氧化碳冰凍切片法，甲醇循環(huán)制冷冰凍切片法等。這些方法，隨著時代的變遷，科技的發(fā)展，許多年前被認(rèn)為是非常重要的技術(shù)，現(xiàn)在也逐步被淘汰了。當(dāng)然有些技術(shù)，如低溫恒冷箱冰凍切片法，正在受到青睞。
一般的步驟大家都知道，也不多說了
1.取材：組織盡可能新鮮、驟冷愈快愈好，才能避免冰晶。而冰晶會對細(xì)胞產(chǎn)生無法彌補的破壞，直接影響免疫組化結(jié)果。所以，一般采用把組織懸于液氮臨界面上10-20秒后將組織投入液氮中驟冷。
2.恒冷箱溫度
　　一般在冷凍后10分鐘，到接近冷室溫度時再切，一般組織在－15～－20℃切片最易成功。每種組織有其合適的切片溫度、刀的溫度和冷室溫度。
3.切片
由于冰凍切片的組織新鮮及驟冷包埋在OCT中，其實組織本身沒有滲透入包埋劑，所以組織本身還是比較軟的。這就對切片的技術(shù)要求比較高了，要求刀片鋒利，刀口角度良好，組織溫度與單片溫度與箱體溫度差合適；要求切片時進(jìn)刀速度和力度都要把握好才能切出一張令人滿意的片子的。而抗卷板的前緣與刀面須有足夠的距離，使切片平滑通過�？咕戆迓愿哂诘睹娴淖罡唿c，得可憑經(jīng)驗調(diào)整刀對組織的角度。
四.冰凍切片的優(yōu)缺點
（一）優(yōu)點：
　　1．簡便，可以不需要對組織固定、脫水、透明、包埋等手續(xù)即可進(jìn)行切片，減少了一些中間環(huán)節(jié)。2．快速，用時短。3．組織變化不大。4．能很好保存脂肪，類脂等成分。5．能夠比較完好地保存各種抗原活性及酶類，特別是對于那些對有機溶劑或熱的溫度耐受能力較差的細(xì)胞膜表面抗原和水解酶保存較好。
（二）缺點：
　　1．不容易做連續(xù)切片。2．切取的組織不能過大，組織過大不容易凍結(jié)或者組織凍結(jié)不均，影響切片及染色效果。3．不容易制作較薄的切片。4．組織塊在凍結(jié)過程中容易產(chǎn)生水的結(jié)晶而影響細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)及抗原物質(zhì)的定位，并且組織結(jié)構(gòu)也不如石蠟切片清晰。

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4樓2011-04-08 19:57:47

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