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[交流]
【求助/交流】枯草芽孢桿菌基因敲除~~
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想請(qǐng)教一下做枯草芽孢桿菌的朋友，枯草芽孢桿菌敲除目前有沒有無抗敲除的方法呢？那個(gè)WB700的菌是利用什么方法獲得的，為什么能夠敲除那么多的基因？都是用的有抗敲除嗎？ 如果總是用抗性的話那是不是只能敲除有限的基因啦？~~ 謝謝幫我解答啦~~~ |
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小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
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1. 無痕敲除的方法很多，有基于mazF的方法，有基于溫敏型質(zhì)粒的方法，基于特異性重組位點(diǎn)的Lox-Cre方法或FRT-Flp法，當(dāng)然還有最近很火熱的CRISPR/cas9；仔細(xì)查文獻(xiàn)，這些方法各有利弊； 2. 枯草的胞外蛋白酶很多，不利于外源蛋白的重組表達(dá)，所以要敲除好多個(gè)基因； 3. WB700的菌的來源可以去查加拿大學(xué)者SUI-LAM WONG教授的文獻(xiàn)； 如（1）Engineering a Bacillus subtilis Expression-Secretion System with a Strain Deficient in Six Extracellular Proteases； 4. WB700菌株里面有3個(gè)基因是有抗性敲除，4個(gè)是無痕敲除； PS：我所在公司提供芽胞桿菌基因敲除的服務(wù)和多種芽孢桿菌的菌株質(zhì)粒，感興趣的可以詳聊！ |
9樓2016-01-21 20:17:44
天使托
無蟲
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rainwander(金幣+5, EPI+1): 呵呵，不錯(cuò)，給予鼓勵(lì) 2011-04-09 17:54:09
bettyshan(金幣+2): 謝謝給了我這么詳細(xì)的回答~~~ 2011-04-10 15:32:42
rainwander(金幣+5, EPI+1): 呵呵，不錯(cuò)，給予鼓勵(lì) 2011-04-09 17:54:09
bettyshan(金幣+2): 謝謝給了我這么詳細(xì)的回答~~~ 2011-04-10 15:32:42
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想請(qǐng)教一下做枯草芽孢桿菌的朋友，枯草芽孢桿菌敲除目前有沒有無抗敲除的方法呢？（你的無抗是指沒有抗生素嗎？當(dāng)然有了，不過你自己詳細(xì)查查，抗生素其實(shí)起到的只是幫助篩選的作用，這樣可以簡(jiǎn)化很多實(shí)驗(yàn)步驟） 那個(gè)WB700的菌是利用什么方法獲得的，（這個(gè)由于我做的是P.aeruginosa,你說的這個(gè)菌還真是沒有見過，不過你可以查閱一下相關(guān)的資料，絕對(duì)有的！） 為什么能夠敲除那么多的基因？（不是為什么能夠敲除那么多基因，而是看你做什么用，如果必要的話才會(huì)去敲除，如果這個(gè)基因和你所研究的課題沒有任何關(guān)系，試問你會(huì)無緣無故去敲除它嗎？NO，浪費(fèi)時(shí)間�。� 都是用的有抗敲除嗎？（敲除基因只是研究基因功能的一個(gè)方法，當(dāng)然了還有別的研究基因的方法，敲除也分很多種，插入突變，缺失突變orRNAi都可以的�。� 如果總是用抗性的話那是不是只能敲除有限的基因啦？~~（并不是，只要你想敲除某個(gè)基因，載體構(gòu)建好之后就可以進(jìn)行敲除。。。。） ps:我一個(gè)一個(gè)給你解答！見括號(hào)！ |
2樓2011-04-09 17:49:20
scelab
新蟲
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3樓2011-04-09 19:07:06
4樓2011-04-09 20:08:45
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