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【求助】液相問題，大家平時又是怎么設(shè)置最后一針Wash的參數(shù)呢？ 已有3人參與
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大家在走完HPLC樣品后是怎么設(shè)置洗針的，道理是什么？ 最近實驗室進了一臺日立HPLC儀，聽裝機器的工程師說，每次走完樣品后需要設(shè)置一針Wash。其流動相設(shè)置分兩段：甲醇：水（1+9），0.8mL/min，走40min；甲醇（100%），0.8mL/min，接著走40min。 感覺這個洗針流動相的梯度過渡似乎有些過于劇烈，想問問高手有沒有必要多設(shè)置一些梯度，如3+7，7+3，再到100%甲醇逐漸過渡來保護柱子，理由是什么？大家平時又是怎么設(shè)置最后一針Wash的參數(shù)呢？ |
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中藥2000
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小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖交流
jiangchunyong(金幣+3, EPI+1): 謝謝！ 2011-04-11 16:49:54
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jiangchunyong(金幣+3, EPI+1): 謝謝！ 2011-04-11 16:49:54
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第一.建議你一般用1.0ml/min的流速洗柱子，洗柱子一般通過柱子的流動相是柱體積的數(shù)倍就行，1.0的流速節(jié)省時間，0.8ml/min的流速很浪費時間，除非柱子很臟或者進氣泡了才用低流速沖洗柱子； 第二.工程師的設(shè)置沒有問題，可以那么做。但為了柱子洗得更徹底，把不同極性的物質(zhì)都從柱子里洗脫出來，建議你采用下面的梯度洗脫： 1.10%-90%（甲醇-水）30min(如果流動相為酸和堿必須從此開始洗脫) 2.30%-70%（甲醇-水）30min 3.50%-50%（甲醇-水）30min 4.70%-30%（甲醇-水）30min 5.100%（甲醇）30min以上 第三.如果時間允許，可以把乙腈也用上再洗脫一次。 如果柱子很臟，可以采用異丙醇低流速洗脫幾次。 第四.以上洗脫程序適用于最常用的反相柱子。 第五.為了延長燈的使用壽命，洗柱子時建議關(guān)燈。 [ Last edited by 中藥2000 on 2011-4-11 at 15:22 ] |
2樓2011-04-11 15:17:12
maoyz0127
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3樓2011-04-11 15:41:21
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4樓2011-04-14 20:18:47
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