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yangxicshe鐵蟲 (小有名氣)
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[交流]
【求助】液相問題，大家平時(shí)又是怎么設(shè)置最后一針Wash的參數(shù)呢？ 已有3人參與
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大家在走完HPLC樣品后是怎么設(shè)置洗針的，道理是什么？ 最近實(shí)驗(yàn)室進(jìn)了一臺(tái)日立HPLC儀，聽裝機(jī)器的工程師說，每次走完樣品后需要設(shè)置一針Wash。其流動(dòng)相設(shè)置分兩段：甲醇：水（1+9），0.8mL/min，走40min；甲醇（100%），0.8mL/min，接著走40min。 感覺這個(gè)洗針流動(dòng)相的梯度過渡似乎有些過于劇烈，想問問高手有沒有必要多設(shè)置一些梯度，如3+7，7+3，再到100%甲醇逐漸過渡來(lái)保護(hù)柱子，理由是什么？大家平時(shí)又是怎么設(shè)置最后一針Wash的參數(shù)呢？ |
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zgf340631735
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karl2100(金幣+1): 多謝指教！ 2011-04-14 21:26:05
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karl2100(金幣+1): 多謝指教！ 2011-04-14 21:26:05
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洗針的程序也不是固定不變的，按照自己的現(xiàn)實(shí)情況具體定。比如你的流動(dòng)相就是水：甲醇=80:20你干嘛還非得按那個(gè)程序沖！直接用純甲醇沖四五十分鐘應(yīng)該就可以了。 還有，比如我現(xiàn)在做的這個(gè)就是水相：甲醇=95：5，而且水相里還有濃度較高的離子對(duì)試劑，那我現(xiàn)在的沖洗方法是水：甲醇=95:5沖一個(gè)小時(shí)。再過渡成80%水然后是20%水，最后用純甲醇。這個(gè)方法一共140min。 |
4樓2011-04-14 20:18:47
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jiangchunyong(金幣+3, EPI+1): 謝謝！ 2011-04-11 16:49:54
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第一.建議你一般用1.0ml/min的流速洗柱子，洗柱子一般通過柱子的流動(dòng)相是柱體積的數(shù)倍就行，1.0的流速節(jié)省時(shí)間，0.8ml/min的流速很浪費(fèi)時(shí)間，除非柱子很臟或者進(jìn)氣泡了才用低流速?zèng)_洗柱子； 第二.工程師的設(shè)置沒有問題，可以那么做。但為了柱子洗得更徹底，把不同極性的物質(zhì)都從柱子里洗脫出來(lái)，建議你采用下面的梯度洗脫： 1.10%-90%（甲醇-水）30min(如果流動(dòng)相為酸和堿必須從此開始洗脫) 2.30%-70%（甲醇-水）30min 3.50%-50%（甲醇-水）30min 4.70%-30%（甲醇-水）30min 5.100%（甲醇）30min以上 第三.如果時(shí)間允許，可以把乙腈也用上再洗脫一次。 如果柱子很臟，可以采用異丙醇低流速洗脫幾次。 第四.以上洗脫程序適用于最常用的反相柱子。 第五.為了延長(zhǎng)燈的使用壽命，洗柱子時(shí)建議關(guān)燈。 [ Last edited by 中藥2000 on 2011-4-11 at 15:22 ] |
2樓2011-04-11 15:17:12
maoyz0127
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3樓2011-04-11 15:41:21
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