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linyingjia

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[交流] 【求助】western blot 濕轉(zhuǎn) 緩沖液甲醇作用已有5人參與

甲醇什么作用呢

我們一般要求250ma恒流電壓維持在40v以上

甲醇應(yīng)該先加還是后加啊甲醇和水的加入順序和電壓有關(guān)嘛甲醇的量和電壓有關(guān)嘛

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1樓 2011-04-11 18:05:04

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314300420

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silicare(金幣+3): 謝謝參與 2011-04-12 13:43:16

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Originally posted by linyingjia at 2011-04-11 18:05:04:
甲醇什么作用呢

我們一般要求250ma恒流電壓維持在40v以上

甲醇應(yīng)該先加還是后加啊甲醇和水的加入順序和電壓有關(guān)嘛甲醇的量和電壓有關(guān)嘛

甲醇應(yīng)該和轉(zhuǎn)緩先混合（一般說的濕轉(zhuǎn)緩沖液都是含有20%甲醇的），4℃預(yù)冷后使用，甲醇濃度不低于10%，不高于20%，可以起到固定作用，既可以固定膠的形態(tài)不至于變形，也可以使蛋白結(jié)合到膜上更穩(wěn)定。恒流時(shí)電壓必定會(huì)變化的，電壓大小不用管，轉(zhuǎn)膜時(shí)電壓會(huì)慢慢變小

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2樓2011-04-12 11:10:01

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Originally posted by 314300420 at 2011-04-12 11:10:01:
甲醇應(yīng)該和轉(zhuǎn)緩先混合（一般說的濕轉(zhuǎn)緩沖液都是含有20%甲醇的），4℃預(yù)冷后使用，甲醇濃度不低于10%，不高于20%，可以起到固定作用，既可以固定膠的形態(tài)不至于變形，也可以使蛋白結(jié)合到膜上更穩(wěn)定。恒流時(shí)電壓必 ...

3樓2011-04-12 12:13:21

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紫琳

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轉(zhuǎn)膜臨用前加20%甲醇。預(yù)先配的轉(zhuǎn)膜緩沖液不含甲醇。

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業(yè)精于勤荒于嬉。

4樓2011-04-12 13:39:52

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預(yù)先配的轉(zhuǎn)膜緩沖液放在4度。

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5樓2011-04-12 13:40:22

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紫琳

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用過的轉(zhuǎn)膜緩沖液可以重復(fù)用幾次，也是臨用前少加一些甲醇即可。

注意轉(zhuǎn)膜時(shí)甲醇必須加否則轉(zhuǎn)不上。膜和膠都要用轉(zhuǎn)膜buffer浸泡10～30min。

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6樓2011-04-12 13:45:33

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耽于美色

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弱弱的問一句：濕轉(zhuǎn)和浸泡PVDF膜時(shí)候的甲醇可以用色譜純的嗎？

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7樓2013-06-21 16:06:48

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zhaoxr0311

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你要濕轉(zhuǎn)最好在4°轉(zhuǎn)，因?yàn)闀?huì)產(chǎn)生大量的熱，影響轉(zhuǎn)膜效果。
像轉(zhuǎn)膜液應(yīng)該提前配好，在配置的過程中會(huì)產(chǎn)熱，所以先放4°冷卻，避免影響轉(zhuǎn)膜
甲醇起到固定作用，據(jù)我所知跟電壓沒有關(guān)系，跟電壓有關(guān)的是里面的離子，比如甘氨酸之類的

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8樓2013-06-21 17:21:33

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