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【求助】固定化酶技術(shù) 已有2人參與
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| 固定化酶技術(shù)實驗 |
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ellenbole
木蟲 (正式寫手)
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樹樹8013(金幣+2): 謝謝專家推薦介紹。 2011-04-13 23:58:18
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樹樹8013(金幣+2): 謝謝專家推薦介紹。 2011-04-13 23:58:18
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可參照 1.“ 固定化α-淀粉酶及活性測定”網(wǎng)址:http://www.docin.com/p-24815823.html 2. 陜西師范大學2007年碩士學位論文《乳糖酶的固定化及其生產(chǎn)低乳糖羊奶的實驗研究》，作者：顧新玲 |
2樓2011-04-13 00:22:23
lovibond
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小木蟲美食家
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nono2009(金幣+5, 食品EPI+1): 鼓勵應助 2011-04-13 09:26:18
sweety: 回帖置頂 2011-12-30 10:15:10
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nono2009(金幣+5, 食品EPI+1): 鼓勵應助 2011-04-13 09:26:18
sweety: 回帖置頂 2011-12-30 10:15:10
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由于酶反應隨著時間的延長，反應速度會逐漸降低，反應后酶不能回收，這就限制了酶的應用范圍。如果能將酶固定在惰性支持物上制成固定化酶，仍具有催化作用，還能回收反復使用，并且生產(chǎn)可以連續(xù)化、自動化。 ㈠ 包埋法 包埋法可分為網(wǎng)格型和微囊型兩種，將酶包埋于高分子凝膠細微網(wǎng)格中的稱為網(wǎng)格型，將酶包埋于高分子半透膜中的稱為微囊型。包埋法很少改變酶的高級結(jié)構(gòu)，酶活回收率較高，因此可以應用于許多酶、微生物和細胞器的固定化。但是在包埋時發(fā)生的化學聚合反應，容易使酶活力降低，需要設計適宜的反應條件。載體通常采用惰性材料，載體上酶的活性是由結(jié)合的酶量(通常為載體材料質(zhì)量的0.1％～10％)和酶的活力(0.1～500 U／mg)決定的。因此，可以通過調(diào)整結(jié)合到特定載體上的酶的數(shù)量，來調(diào)節(jié)固定化酶的活力。 ㈡ 吸附法 ⒈ 物理吸附法 酶被吸附于不溶性載體的一種固定化方法。此類載體很多，無機載體有多孔玻璃、活性炭、酸性白土、漂白土、氧化鋁、硅膠、膨潤土、羥基磷酸灰石、磷酸鈣、陶瓷、金屬氧化物等；天然高分子載體有淀粉、白蛋白、纖維素衍生物等；大孔型合成樹脂等。 ⒉ 離子吸附法 這是酶通過離子鍵吸附于有離子交換基的水不溶性載體的固定化方法。用于此法的載體有陰離子交換劑如DEAE-纖維素，DEAE-葡萄糖凝膠，Amberlite IRA-93，IRA-410，IRA-900；陽離子交換劑如羧甲基纖維素，Amberlite CG-50，IR-120，Dowex-50等。 ㈢ 共價偶聯(lián)法 這是酶與載體以共價鍵結(jié)合的固定化方法。共價偶聯(lián)法所用載體主要有：天然有機載體、無機載體、合成聚合物等。酶分子中可以形成共價鍵的基團主要有：α-氨基或ε-氨基，α、β或γ位的羥基、巰基、咪唑基、酚基等。 要使載體與酶形成共價鍵，必須首先使載體活化，即借助于某種方法，在載體上引進某一活性基團。然后此活性基團與酶分子上的某一基團反應，形成共價鍵。 ㈣ 交聯(lián)法 借助于雙功能或多功能試劑使酶與酶或微生物細胞與微生物細胞之間發(fā)生交聯(lián)反應，制成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的固定化酶方法稱為交聯(lián)法。交聯(lián)法也可用于含酶菌體碎片的固定化。 參與交聯(lián)反應的酶蛋白的功能團有N末端的α-氨基、賴氨酸的ε-氨基、酪氨酸的酚基、半胱氨基的巰基和組氨酸的咪唑基等。作為交聯(lián)劑有形成希夫堿的戊二醛，形成肽鍵的異氰酸酯，發(fā)生重氮偶合反應的雙重氮聯(lián)苯胺或N,N’-乙烯雙馬來亞胺等。其中最常用的交聯(lián)劑是戊二醛，它有兩個醛基，這兩個醛基都可與酶或蛋白質(zhì)的游離氨基反應. ㈤ 非共價結(jié)合法 對于在水不溶的有機相中進行的反應，最簡單的固定化方法是結(jié)晶法和分散法。 根據(jù)你的酶的不同，可能會有相對于更適合的固定化方法，樓主還要根據(jù)自己的酶來選擇方法。 至于實驗過程，無非就是確定載體，最適合PH，固定化試劑，溫度，時間，等等。 |
3樓2011-04-13 09:14:45
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