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韋沃茗金蟲(chóng) (初入文壇)
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[交流]
【求助】固定化酶技術(shù) 已有2人參與
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ellenbole
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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可參照 1.“ 固定化α-淀粉酶及活性測(cè)定”網(wǎng)址:http://www.docin.com/p-24815823.html 2. 陜西師范大學(xué)2007年碩士學(xué)位論文《乳糖酶的固定化及其生產(chǎn)低乳糖羊奶的實(shí)驗(yàn)研究》，作者：顧新玲 |
2樓2011-04-13 00:22:23
lovibond
榮譽(yù)版主 (文壇精英)
小木蟲(chóng)美食家
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nono2009(金幣+5, 食品EPI+1): 鼓勵(lì)應(yīng)助 2011-04-13 09:26:18
sweety: 回帖置頂 2011-12-30 10:15:10
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nono2009(金幣+5, 食品EPI+1): 鼓勵(lì)應(yīng)助 2011-04-13 09:26:18
sweety: 回帖置頂 2011-12-30 10:15:10
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由于酶反應(yīng)隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，反應(yīng)速度會(huì)逐漸降低，反應(yīng)后酶不能回收，這就限制了酶的應(yīng)用范圍。如果能將酶固定在惰性支持物上制成固定化酶，仍具有催化作用，還能回收反復(fù)使用，并且生產(chǎn)可以連續(xù)化、自動(dòng)化。 ㈠ 包埋法 包埋法可分為網(wǎng)格型和微囊型兩種，將酶包埋于高分子凝膠細(xì)微網(wǎng)格中的稱(chēng)為網(wǎng)格型，將酶包埋于高分子半透膜中的稱(chēng)為微囊型。包埋法很少改變酶的高級(jí)結(jié)構(gòu)，酶活回收率較高，因此可以應(yīng)用于許多酶、微生物和細(xì)胞器的固定化。但是在包埋時(shí)發(fā)生的化學(xué)聚合反應(yīng)，容易使酶活力降低，需要設(shè)計(jì)適宜的反應(yīng)條件。載體通常采用惰性材料，載體上酶的活性是由結(jié)合的酶量(通常為載體材料質(zhì)量的0.1％～10％)和酶的活力(0.1～500 U／mg)決定的。因此，可以通過(guò)調(diào)整結(jié)合到特定載體上的酶的數(shù)量，來(lái)調(diào)節(jié)固定化酶的活力。 ㈡ 吸附法 ⒈ 物理吸附法 酶被吸附于不溶性載體的一種固定化方法。此類(lèi)載體很多，無(wú)機(jī)載體有多孔玻璃、活性炭、酸性白土、漂白土、氧化鋁、硅膠、膨潤(rùn)土、羥基磷酸灰石、磷酸鈣、陶瓷、金屬氧化物等；天然高分子載體有淀粉、白蛋白、纖維素衍生物等；大孔型合成樹(shù)脂等。 ⒉ 離子吸附法 這是酶通過(guò)離子鍵吸附于有離子交換基的水不溶性載體的固定化方法。用于此法的載體有陰離子交換劑如DEAE-纖維素，DEAE-葡萄糖凝膠，Amberlite IRA-93，IRA-410，IRA-900；陽(yáng)離子交換劑如羧甲基纖維素，Amberlite CG-50，IR-120，Dowex-50等。 ㈢ 共價(jià)偶聯(lián)法 這是酶與載體以共價(jià)鍵結(jié)合的固定化方法。共價(jià)偶聯(lián)法所用載體主要有：天然有機(jī)載體、無(wú)機(jī)載體、合成聚合物等。酶分子中可以形成共價(jià)鍵的基團(tuán)主要有：α-氨基或ε-氨基，α、β或γ位的羥基、巰基、咪唑基、酚基等。 要使載體與酶形成共價(jià)鍵，必須首先使載體活化，即借助于某種方法，在載體上引進(jìn)某一活性基團(tuán)。然后此活性基團(tuán)與酶分子上的某一基團(tuán)反應(yīng)，形成共價(jià)鍵。 ㈣ 交聯(lián)法 借助于雙功能或多功能試劑使酶與酶或微生物細(xì)胞與微生物細(xì)胞之間發(fā)生交聯(lián)反應(yīng)，制成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的固定化酶方法稱(chēng)為交聯(lián)法。交聯(lián)法也可用于含酶菌體碎片的固定化。 參與交聯(lián)反應(yīng)的酶蛋白的功能團(tuán)有N末端的α-氨基、賴(lài)氨酸的ε-氨基、酪氨酸的酚基、半胱氨基的巰基和組氨酸的咪唑基等。作為交聯(lián)劑有形成希夫堿的戊二醛，形成肽鍵的異氰酸酯，發(fā)生重氮偶合反應(yīng)的雙重氮聯(lián)苯胺或N,N’-乙烯雙馬來(lái)亞胺等。其中最常用的交聯(lián)劑是戊二醛，它有兩個(gè)醛基，這兩個(gè)醛基都可與酶或蛋白質(zhì)的游離氨基反應(yīng). ㈤ 非共價(jià)結(jié)合法 對(duì)于在水不溶的有機(jī)相中進(jìn)行的反應(yīng)，最簡(jiǎn)單的固定化方法是結(jié)晶法和分散法。 根據(jù)你的酶的不同，可能會(huì)有相對(duì)于更適合的固定化方法，樓主還要根據(jù)自己的酶來(lái)選擇方法。 至于實(shí)驗(yàn)過(guò)程，無(wú)非就是確定載體，最適合PH，固定化試劑，溫度，時(shí)間，等等。 |
3樓2011-04-13 09:14:45
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