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[交流]
【求助】關(guān)于乙醇沉淀蛋白問題，請(qǐng)各位幫忙
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最近想用乙醇沉淀蛋白，看到文獻(xiàn)上寫加預(yù)冷的無(wú)水乙醇至乙醇濃度為70%（v/v）,如果我有100ml蛋白粗提液，該加入多少乙醇才能使乙醇濃度達(dá)到70%？請(qǐng)各位幫忙解答，謝謝 附：文獻(xiàn)原文 The supernatant (300 mL) obtained was then fractionated with iced ethanol by adapted methodology of Cortez and Pessoa (1999). The ethanol concentration values employed in the precipitation experiments were 0–30% (Fraction F1) and 30–70% (Fraction F2). For each fraction, the ethanol was slowly added to the extract under agitation (200 rpm) at 4 °C with a burette in a cold chamber. After the addition of ethanol, the agitation was stopped for 2 h and the mixture was centrifuged at 10,000g for 15 min at 4 °C. The pellets (Fraction F1 and F2) were dissolved in 75 mL 0.1 M Tris–HCl buffer (pH 8.0) at 25 °C and dialyzed against 4 L of 0.05 M Tris–HCl buffer (pH 8.0) for 2 h. |
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2樓2011-04-14 07:45:35
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reasonspare(金幣+1): 積極交流獎(jiǎng) 2011-04-14 11:36:15
mexes(金幣+5): 2011-04-28 01:15:00
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沒做過(guò) 百度到的 蛋白質(zhì)含量，離子強(qiáng)度，溶液pH值，乙醇濃度，溶液溫度。 1。蛋白質(zhì)含量，愈高，共沉多；反之，分離愈徹底。當(dāng)然有度。溶液太稀了，成本高。 2。離子強(qiáng)度：這與介電強(qiáng)度有關(guān)。 3。溶液pH值：調(diào)到目標(biāo)蛋白等電點(diǎn)周圍。 4。乙醇濃度：一般來(lái)說(shuō)乙醇濃度多少，與目標(biāo)蛋白的分子量有關(guān)：比如8%，可沉淀纖維蛋白原，20%可沉淀球蛋白，40%可沉淀白蛋白等等，當(dāng)然，乙醇濃度與溶液pH值配合使用。加入乙醇不能過(guò)快，防止局部過(guò)濃。要邊加邊搖動(dòng)。 否則，共沉多！或者局部變性。 5。溶液溫度：必須低溫，乙醇反應(yīng)是個(gè)放熱反應(yīng)，如果溫度高，可引起蛋白質(zhì)變性，不可逆的變形。 這五變參數(shù)，要綜合，動(dòng)態(tài)的調(diào)整，可達(dá)到精確分離蛋白質(zhì)的作用。 |
3樓2011-04-14 08:01:39
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