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[交流]
【求助】關(guān)于乙醇沉淀蛋白問題，請各位幫忙
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最近想用乙醇沉淀蛋白，看到文獻上寫加預冷的無水乙醇至乙醇濃度為70%（v/v）,如果我有100ml蛋白粗提液，該加入多少乙醇才能使乙醇濃度達到70%？請各位幫忙解答，謝謝 附：文獻原文 The supernatant (300 mL) obtained was then fractionated with iced ethanol by adapted methodology of Cortez and Pessoa (1999). The ethanol concentration values employed in the precipitation experiments were 0–30% (Fraction F1) and 30–70% (Fraction F2). For each fraction, the ethanol was slowly added to the extract under agitation (200 rpm) at 4 °C with a burette in a cold chamber. After the addition of ethanol, the agitation was stopped for 2 h and the mixture was centrifuged at 10,000g for 15 min at 4 °C. The pellets (Fraction F1 and F2) were dissolved in 75 mL 0.1 M Tris–HCl buffer (pH 8.0) at 25 °C and dialyzed against 4 L of 0.05 M Tris–HCl buffer (pH 8.0) for 2 h. |
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2樓2011-04-14 07:45:35
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mexes(金幣+5): 2011-04-28 01:15:00
reasonspare(金幣+1): 積極交流獎 2011-04-14 11:36:15
mexes(金幣+5): 2011-04-28 01:15:00
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沒做過 百度到的 蛋白質(zhì)含量，離子強度，溶液pH值，乙醇濃度，溶液溫度。 1。蛋白質(zhì)含量，愈高，共沉多；反之，分離愈徹底。當然有度。溶液太稀了，成本高。 2。離子強度：這與介電強度有關(guān)。 3。溶液pH值：調(diào)到目標蛋白等電點周圍。 4。乙醇濃度：一般來說乙醇濃度多少，與目標蛋白的分子量有關(guān)：比如8%，可沉淀纖維蛋白原，20%可沉淀球蛋白，40%可沉淀白蛋白等等，當然，乙醇濃度與溶液pH值配合使用。加入乙醇不能過快，防止局部過濃。要邊加邊搖動。 否則，共沉多！或者局部變性。 5。溶液溫度：必須低溫，乙醇反應是個放熱反應，如果溫度高，可引起蛋白質(zhì)變性，不可逆的變形。 這五變參數(shù)，要綜合，動態(tài)的調(diào)整，可達到精確分離蛋白質(zhì)的作用。 |
3樓2011-04-14 08:01:39
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