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【求助/交流】氧化亞鐵硫桿菌和氧化硫硫桿菌的染色計(jì)數(shù)方法 已有2人參與
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最近我要做微生物淋濾實(shí)驗(yàn)，現(xiàn)在已經(jīng)大致從底泥中分離出了這兩種微生物。從文獻(xiàn)中查到T.f和Tt分別用草酸銨結(jié)晶紫和石碳酸復(fù)紅染色。 張冬艷, 氧化亞鐵硫桿菌生長量的染色測定法. 內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào), 1996(02).見附件 結(jié)晶紫染色血球計(jì)數(shù)器法:用上述同一份菌液5ml加結(jié)晶紫染液1ml,混勻后, 用血球計(jì)數(shù)器法鏡下計(jì)數(shù)藍(lán)色的活菌數(shù), 重復(fù)計(jì)數(shù)5次.染色后放置5h 活菌計(jì)數(shù):取上述同一份菌液5ml加結(jié)晶紫染液1ml ,混勻后放置5h , 用上述方法測定, 重復(fù)計(jì)數(shù)5次. 我今天試了草酸銨結(jié)晶紫染色T.f染色（在試管中滴加染色液染色）后一段時(shí)間（用顯微鏡40×10）在血球計(jì)數(shù)板上可以看到有微生物（貌似是桿狀的）在動并且看起來像是兩個(gè)菌體粘再一起的。然后試了一下油鏡，在油鏡下血球計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)區(qū)的線不清晰，雖然能看到有少量微生物在活動。 問題 1.蓋玻片（新買的）上有花紋么，有人說時(shí)蓋玻片是臟的，蓋玻片在使用前要處理么； 2.不能確定活動的微生物是否是目標(biāo)微生物，有沒有簡單的方法來確定它（藍(lán)色背景下微生物顏色不是太清晰），相差顯微鏡在觀察時(shí)要用什么樣的濾光片（現(xiàn)有藍(lán)、黃、綠、白）； 3.染色液是配后放置48h然后再使用么；染色時(shí)間具體為多長為宜，文獻(xiàn)說5h時(shí)后菌體仍是活的，今天過了2h好像就看不到微生物在動了； 4.用顯微鏡計(jì)數(shù)實(shí)在廢眼，求簡便方法。 |
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newtime007
木蟲 (正式寫手)
成長的微生物
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rainwander(金幣+3, EPI+1): 鼓勵交流~~ 2011-04-15 08:07:39
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結(jié)合自己的工作，作出回答，希望能幫到你。 1.蓋玻片（新買的）上有花紋么，有人說時(shí)蓋玻片是臟的，蓋玻片在使用前要處理么； 一般情況下新買蓋玻片沒有花紋，不用處理，不影響使用。如果不放心可以用0.1mol/L鹽酸浸泡，用純水沖干凈即可。 2.不能確定活動的微生物是否是目標(biāo)微生物，有沒有簡單的方法來確定它（藍(lán)色背景下微生物顏色不是太清晰），相差顯微鏡在觀察時(shí)要用什么樣的濾光片（現(xiàn)有藍(lán)、黃、綠、白）； 是否是你的目標(biāo)微生物，不是通過顯微鏡來確定的，顯微鏡只是觀察你的菌是否正常。你只有確保培養(yǎng)的微生物是純菌落，且是你的目標(biāo)微生物，再來觀察，至于清晰與否，適當(dāng)調(diào)整光源強(qiáng)度，也可選用濾光片。 3.染色液是配后放置48h然后再使用么；染色時(shí)間具體為多長為宜，文獻(xiàn)說5h時(shí)后菌體仍是活的，今天過了2h好像就看不到微生物在動了； 染色液沒有規(guī)定放置多長時(shí)間才能使用，一般靜置的目的是讓不溶晶體沉淀，以免干擾視野，你可以超聲溶解，或過濾就可使用。用結(jié)晶紫染色軍體易死亡，至于你所說的情況，可能與染色液濃度有關(guān)。但最好染色后就鏡檢。 4.用顯微鏡計(jì)數(shù)實(shí)在廢眼，求簡便方法。 顯微鏡計(jì)數(shù)快，也可稀釋涂平板計(jì)數(shù)，這樣得到的是活菌數(shù)。 |
2樓2011-04-14 20:14:04
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521孟曉瑜
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