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[交流]
【求助】分子篩柱效測定
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| 分子篩柱效測定一般選擇1%丙酮上樣(體積為1%柱床體積),上樣量大了或者小了有什么影響呢? |
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專家顧問 (知名作家)
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這是GE公司SuperdexTM 75說明書的部分介紹,我把說明書作為附件傳上來 Column performance control Check the performance of the column using the following procedure: Sample: 100 μl 0.5% acetone (5mg/ml) Eluent: buffer solution or distilled H2O Flow rate: 0.75 ml/min, room temperature Detection: 280 nm Column efficiency, expressed as the number of theoretical plates per meter, N/m, is calculated using the following equation: N/m = 5.54 × (vr / w½ 平方 × (1000/L)where N/m = number of theoretical plates/meter vr = peak elution distance (m) w½ = peak width at half peak height (m) L = bed height (m) 上述層析柱長0.24m。 假如上樣量體積大,則峰寬與半峰寬更接近,比值更接近1,則理論塔板數(shù)/m更小,柱效低。另外,樓主所用的體積如果依據(jù)這個說明書來看就太大了。PS:用丙酮測柱效而不是用蛋白質(zhì),二樓說的是分離蛋白質(zhì)時上樣量的問題。 [ Last edited by 冼亮淀粉酶 on 2011-4-16 at 19:57 ] |
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