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迷糊的orange銀蟲 (小有名氣)
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[交流]
【求助】真菌中已變性的蛋白質(zhì)的提取方法 已有4人參與
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| 請(qǐng)問(wèn)一下，有哪位高人知道，真菌經(jīng)100度問(wèn)題處理過(guò)三小時(shí)后，采用什么方法還能將其中的蛋白質(zhì)提取出來(lái)？ |
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迷糊的orange
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2樓2011-04-15 19:55:11
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sweety: 回帖置頂 2011-12-30 09:22:35
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首先準(zhǔn)備以下幾種試劑。配制裂解液：50 mmol/L Tris-HCl；2 mmol/L EDTA；100 mmol/L NaCl；0.5% TritonX-100，調(diào)pH至8.5~9.0備用。用前加入100 μg/mL溶菌酶，1 μl/mL的蛋白酶抑制劑PMSF。 將菌液在12 000×g，4 ℃下離心15 min收集菌體，沉淀用PBS懸浮洗滌兩遍，最后加入1 mL裂解液懸浮菌體。在冰浴中用超聲波破碎儀破壁(工作時(shí)間:間歇時(shí)間=1:3)，超聲15 min，隨即離心(12 000×g，10 min，4 ℃)去除細(xì)胞碎片，得到無(wú)細(xì)胞提取物，里面富含蛋白質(zhì)，通過(guò)試劑盒可以測(cè)定其中蛋白質(zhì)的濃度。 另外補(bǔ)充一點(diǎn)：細(xì)胞破壁的方法可以還有通過(guò)反復(fù)凍融或者用磁力珠攪拌菌液。 |
3樓2011-04-15 23:17:00
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4樓2011-04-16 09:27:11
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