cclday

銀蟲 (正式寫手)

MicEPI: 1
應助: 0 (幼兒園)
金幣: 252.6
散金: 1000
紅花: 3
帖子: 585
在線: 301.1小時
蟲號: 460596
注冊: 2007-11-16
專業(yè): 微生物資源與分類學

[求助] 絲狀真菌提取總DNA問題

CTAB法提取真菌DNA最后用異丙醇沉淀后使用無菌水無法完全溶解沉淀，這事怎么回事？

[ Last edited by cclday on 2011-6-14 at 08:39 ]

回復此樓

» 猜你喜歡

281求調劑（0805）已經(jīng)有8人回復
環(huán)境領域全國重點實驗室招收博士1-2名已經(jīng)有3人回復
材料專碩306英一數(shù)二已經(jīng)有10人回復
301求調劑已經(jīng)有6人回復
一志愿天津大學化學工藝專業(yè)（081702）315分求調劑已經(jīng)有7人回復
302求調劑已經(jīng)有6人回復
26博士申請已經(jīng)有3人回復
268求調劑已經(jīng)有3人回復
311求調劑已經(jīng)有10人回復
被我言中：新模板不強調格式了，假專家開始管格式了已經(jīng)有4人回復

» 本主題相關價值貼推薦，對您同樣有幫助:

提取絲狀真菌DNA 已經(jīng)有16人回復
真菌基因組提取已經(jīng)有6人回復
DNA試劑盒提取完DNA后的問題已經(jīng)有17人回復
真菌菌絲體提取DNA問題已經(jīng)有10人回復
CTAB法提取真菌DNA的求助已經(jīng)有4人回復
一株芽孢桿菌的DNA提取問題已經(jīng)有6人回復
真菌DNA提取測序的一些問題已經(jīng)有5人回復
關于提取真菌DNA的方法已經(jīng)有9人回復
SDS 提取液如何配置已經(jīng)有7人回復
關于DNA提取的一些問題已經(jīng)有13人回復
DNA 3' 5'問題已經(jīng)有5人回復
在用液氮研磨樣品提取DNA時，最需要注意什么問題？已經(jīng)有5人回復
請教：這個可能是什么絲狀真菌已經(jīng)有9人回復
真菌基因組DAN提取圖片，求高人指點已經(jīng)有20人回復
第一次使用Trizol提取DNA 已經(jīng)有4人回復
為什么DNA提取總降解已經(jīng)有15人回復
絲狀真菌的基因敲除已經(jīng)有7人回復
【求助/交流】提取真菌DNA或RNA一定要液氮研磨嗎？已經(jīng)有7人回復
【求助/交流】提DNA，無水乙醇已經(jīng)有17人回復
【求助/交流】提取DNA總提不出來已經(jīng)有23人回復

1樓 2011-06-14 07:58:51

已閱回復此樓關注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

回帖支持 ( 顯示支持度最高的前 50 名 )

冼亮淀粉酶

專家顧問 (知名作家)

生物大分子降解酶

專家經(jīng)驗: +248
MicEPI: 114
應助: 257 (大學生)
貴賓: 0.272
金幣: 19454.4
散金: 1704
紅花: 121
帖子: 6586
在線: 2777.2小時
蟲號: 856414
注冊: 2009-09-25
性別: GG
專業(yè): 環(huán)境微生物學
管轄: 微生物

【答案】應助回帖

★ ★ ★
amisking(金幣+3, EPI+1): 鼓勵應助 2011-06-14 19:00:12

2.4.14.1真菌總DNA的提取
（1）接種菌株至液體培養(yǎng)基中，28℃，180rpm振蕩培養(yǎng)3天；
（2）用滅菌紗布過濾，并壓干菌體；
（3）將菌絲體倒入研缽（滅菌并預冷），迅速倒入液氮，研磨至粉末狀；
（4）將粉末移至1.5mL的EP管中，加入600µL真菌提取液；
（5）加等體積苯酚/氯仿，輕輕倒轉混合，10000rpm離心10min；
（6）取400µL上清液移入新的1.5mlLEP管，重復步驟（5）；
（7）取上清液，加入兩倍體積無水乙醇，-20℃放置30min；
（8）10000rpm 離心10min，75%乙醇洗沉淀2次，真空干燥；
（9）以20µL 1×TE 溶解沉淀；
（10）電泳檢測總DNA的濃度。

（5）DNA抽提液的配置
表 2.5 DNA抽提液的配置
成分濃度
NaCl 200mmol/L
EDTA-Na2 4mmol/L
SDS 2%
Tris-HCl(pH=8.0) 100mmol/L

贊一下(2人)

回復此樓

流星來時我許了個愿，愿我有吃有喝還有舒服的豬圈。討厭發(fā)帖前不搜索論壇重復發(fā)帖和僅把論壇當解決問題工具，久不看論壇一來就提問者，寧棄EPI和VIP也不回帖。

5樓2011-06-14 17:09:56

已閱回復此樓關注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

普通回帖

瘋狂修行者

木蟲 (正式寫手)

MicEPI: 3
應助: 6 (幼兒園)
金幣: 3121.2
散金: 753
紅花: 8
帖子: 721
在線: 111.2小時
蟲號: 332393
注冊: 2007-03-26
性別: GG
專業(yè): 農(nóng)業(yè)昆蟲學

【答案】應助回帖

cclday(金幣+5): 2011-06-14 09:01:37
amisking(EPI+1): 鼓勵應助 2011-06-14 19:00:02

（1）可能是你干燥時間太長了，你可以放在65度下煮一下，或者把水先65度預熱。
（2）也可能是你提取的DNA不純，有雜質。

你可以試一下有尿素提取的方法，以前我用過，參考文獻：
一種提取植物基因組DNA的方法改良尿素法
曹文波，鄭璐璐，謝文海
(1．華中師范大學生命科學學院，武漢430079；2．廣西玉林師范學院，廣西玉林537000)

贊一下(1人)

回復此樓

戒驕戒躁，坦蕩做人，平常心做事，享受生活之美�。�

2樓2011-06-14 08:53:24

已閱回復此樓關注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

cclday

銀蟲 (正式寫手)

MicEPI: 1
應助: 0 (幼兒園)
金幣: 252.6
散金: 1000
紅花: 3
帖子: 585
在線: 301.1小時
蟲號: 460596
注冊: 2007-11-16
專業(yè): 微生物資源與分類學

引用回帖:

Originally posted by 瘋狂修行者 at 2011-06-14 08:53:24:
（1）可能是你干燥時間太長了，你可以放在65度下煮一下，或者把水先65度預熱。
（2）也可能是你提取的DNA不純，有雜質。

你可以試一下有尿素提取的方法，以前我用過，參考文獻：
一種提取植物基因組DNA的方法 ...

按照你方法1我先試試。謝謝了

贊一下

回復此樓

3樓2011-06-14 09:01:25

已閱回復此樓關注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

fungixx

至尊木蟲 (文壇精英)

MicEPI: 2
應助: 37 (小學生)
貴賓: 3.458
金幣: 19627.6
散金: 18645
紅花: 118
沙發(fā): 273
帖子: 13324
在線: 2030.7小時
蟲號: 860534
注冊: 2009-09-30
專業(yè): 抗腫瘤藥物藥理

【答案】應助回帖

cclday(金幣+5): 2011-06-14 17:08:29

應該是蛋白質沒有除盡的多抽提幾次~

贊一下

回復此樓

幾年前踏上火車那一刻都還沒有意識到,從此故鄉(xiāng)只有冬夏,再無春秋

4樓2011-06-14 15:11:53

已閱回復此樓關注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

專家顧問 (知名作家)

生物大分子降解酶

專家經(jīng)驗: +248
MicEPI: 114
應助: 257 (大學生)
貴賓: 0.272
金幣: 19454.4
散金: 1704
紅花: 121
帖子: 6586
在線: 2777.2小時
蟲號: 856414
注冊: 2009-09-25
性別: GG
專業(yè): 環(huán)境微生物學
管轄: 微生物

µL 是發(fā)上來之后出現(xiàn)的亂碼，微升

贊一下

回復此樓

6樓2011-06-14 17:11:22

已閱回復此樓關注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

張曉梅ZXM

金蟲 (正式寫手)

meimeizhang

應助: 3 (幼兒園)
金幣: 5321.6
散金: 22
紅花: 2
帖子: 420
在線: 147.3小時
蟲號: 848646
注冊: 2009-09-15
性別: MM
專業(yè): 微生物資源與分類學

可能是雜質未除盡~~~~我以前也碰到過，看你提ＤＮＡ做什么用，如果要求質量不是很高的話可以把溶解了的純化一下，肯定多少都提出來一些了的。

贊一下

回復此樓

每天進步一點點，持之以恒！

7樓2011-06-14 18:50:34

已閱回復此樓關注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

cclday

銀蟲 (正式寫手)

MicEPI: 1
應助: 0 (幼兒園)
金幣: 252.6
散金: 1000
紅花: 3
帖子: 585
在線: 301.1小時
蟲號: 460596
注冊: 2007-11-16
專業(yè): 微生物資源與分類學

謝謝大家的熱心幫助。

贊一下

回復此樓

8樓2011-06-15 08:20:29

已閱回復此樓關注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

liuyu_sdili

木蟲 (正式寫手)

MicEPI: 1
應助: 53 (初中生)
金幣: 3045.9
散金: 15
紅花: 2
帖子: 394
在線: 311.7小時
蟲號: 1130112
注冊: 2010-10-23
性別: GG
專業(yè): 微生物生理與生物化學

引用回帖:

Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-06-14 17:09:56:
2.4.14.1真菌總DNA的提取
（1）接種菌株至液體培養(yǎng)基中，28℃，180rpm振蕩培養(yǎng)3天；
（2）用滅菌紗布過濾，并壓干菌體；
（3）將菌絲體倒入研缽（滅菌并預冷），迅速倒入液氮，研磨至粉末狀；
（4）將粉末移至 ...

我也要做真菌方面的課題，不知道氯化芐法行不行,請指教~~~~

贊一下

回復此樓

9樓2011-06-15 16:40:43

已閱回復此樓關注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

專家顧問 (知名作家)

生物大分子降解酶

專家經(jīng)驗: +248
MicEPI: 114
應助: 257 (大學生)
貴賓: 0.272
金幣: 19454.4
散金: 1704
紅花: 121
帖子: 6586
在線: 2777.2小時
蟲號: 856414
注冊: 2009-09-25
性別: GG
專業(yè): 環(huán)境微生物學
管轄: 微生物

引用回帖:

Originally posted by liuyu_sdili at 2011-06-15 16:40:43:
我也要做真菌方面的課題，不知道氯化芐法行不行,請指教~~~~

我對這個方法不了解，第一次聽說，所以就查了一下，不敢說我查到的東西是真的或者是最好的，就說一下我的想法：這個方法太浪費時間了，單單是破碎細胞就要保溫一個小時！而且操作也不比我用的方法簡單，試劑也不省，實在不適合我用，但不是說不適合別人用。這些也只是我的想法，別人怎么看我就不知道了。

http://www.ceps.com.tw/ec/ecjnlarticleView.aspx?atliid=435190

贊一下

回復此樓

10樓2011-06-15 17:03:09

已閱回復此樓關注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

最具人氣熱帖推薦 [查看全部]	作者	回/看	最后發(fā)表

[考研] 302求調劑 +6	呼呼呼。。。。 2026-03-17	6/300	2026-03-17 23:56 by 星空星月
[考研] 0703化學調劑，六級已過，有科研經(jīng)歷 +8	曦熙兮 2026-03-15	8/400	2026-03-17 20:31 by xilongliang
[考研] 328求調劑，英語六級551，有科研經(jīng)歷 +3	生物工程調劑 2026-03-16	8/400	2026-03-17 19:03 by Wangjingyue
[考研] 326求調劑 +5	上岸的小葡 2026-03-15	6/300	2026-03-17 17:26 by ruiyingmiao
[考研] 化學工程321分求調劑 +11	大米飯！ 2026-03-15	14/700	2026-03-17 17:11 by ruiyingmiao
[考研] 本人考085602 化學工程專碩 +16	不知道叫什么！ 2026-03-15	18/900	2026-03-17 17:05 by ruiyingmiao
[考研] 有沒有道鐵/土木的想調劑南林，給自己招師弟中～ +3	TqlXswl 2026-03-16	7/350	2026-03-17 15:23 by TqlXswl
[考研] 267一志愿南京工業(yè)大學0817化工求調劑 +6	SUICHILD 2026-03-12	6/300	2026-03-17 09:24 by 霧散后相遇lc
[考研] 286求調劑 +3	lemonzzn 2026-03-16	5/250	2026-03-16 20:43 by lemonzzn
[考研] 304求調劑 +5	素年祭語 2026-03-15	5/250	2026-03-16 17:00 by 我的船我的海
[考研] 0703化學調劑 +6	妮妮ninicgb 2026-03-15	9/450	2026-03-16 16:40 by houyaoxu
[教師之家] 焦慮 +7	水冰月月野兔 2026-03-13	9/450	2026-03-16 10:00 by Quakerbird
[考研] 復試調劑 +3	呼呼？~+123456 2026-03-14	3/150	2026-03-14 16:53 by WTUChen
[考研] 復試調劑 +4	z1z2z3879 2026-03-14	5/250	2026-03-14 16:30 by JourneyLucky
[考研] 0703化學調劑 +4	快樂的香蕉 2026-03-11	4/200	2026-03-13 22:41 by JourneyLucky
[考研] 333求調劑 +3	球球古力 2026-03-11	3/150	2026-03-13 21:27 by JourneyLucky
[考研] 315求調劑 +9	小羊小羊_ 2026-03-11	10/500	2026-03-13 21:13 by SXNU李老師
[考研] 26調劑/材料科學與工程/總分295/求收留 +9	2026調劑俠 2026-03-12	9/450	2026-03-13 20:46 by 18595523086
[考研] 314求調劑 +7	無懈可擊的巨人 2026-03-12	7/350	2026-03-13 15:40 by JourneyLucky
[考研] 295求調劑 +3	小匕仔汁 2026-03-12	3/150	2026-03-13 15:17 by vgtyfty