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絲狀真菌提取總DNA問(wèn)題
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CTAB法提取真菌DNA最后用異丙醇沉淀后使用無(wú)菌水無(wú)法完全溶解沉淀，這事怎么回事？ [ Last edited by cclday on 2011-6-14 at 08:39 ] |
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【答案】應(yīng)助回帖
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amisking(金幣+3, EPI+1): 鼓勵(lì)應(yīng)助 2011-06-14 19:00:12
amisking(金幣+3, EPI+1): 鼓勵(lì)應(yīng)助 2011-06-14 19:00:12
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2.4.14.1真菌總DNA的提取 （1）接種菌株至液體培養(yǎng)基中，28℃，180rpm振蕩培養(yǎng)3天； （2）用滅菌紗布過(guò)濾，并壓干菌體； （3）將菌絲體倒入研缽（滅菌并預(yù)冷），迅速倒入液氮，研磨至粉末狀； （4）將粉末移至1.5mL的EP管中，加入600µL真菌提取液； （5）加等體積苯酚/氯仿，輕輕倒轉(zhuǎn)混合，10000rpm離心10min； （6）取400µL上清液移入新的1.5mlLEP管，重復(fù)步驟（5）； （7）取上清液，加入兩倍體積無(wú)水乙醇，-20℃放置30min； （8）10000rpm 離心10min，75%乙醇洗沉淀2次，真空干燥； （9）以20µL 1×TE 溶解沉淀； （10）電泳檢測(cè)總DNA的濃度。 （5）DNA抽提液的配置 表 2.5 DNA抽提液的配置 成分 濃度 NaCl 200mmol/L EDTA-Na2 4mmol/L SDS 2% Tris-HCl(pH=8.0) 100mmol/L |
5樓2011-06-14 17:09:56
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【答案】應(yīng)助回帖
cclday(金幣+5): 2011-06-14 09:01:37
amisking(EPI+1): 鼓勵(lì)應(yīng)助 2011-06-14 19:00:02
amisking(EPI+1): 鼓勵(lì)應(yīng)助 2011-06-14 19:00:02
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（1）可能是你干燥時(shí)間太長(zhǎng)了，你可以放在65度下煮一下，或者把水先65度預(yù)熱。 （2）也可能是你提取的DNA不純，有雜質(zhì)。 你可以試一下有尿素提取的方法，以前我用過(guò)，參考文獻(xiàn)： 一種提取植物基因組DNA的方法 改良尿素法 曹文波 ，鄭璐璐 ，謝文海 (1．華中師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，武漢430079；2．廣西玉林師范學(xué)院，廣西玉林537000) |
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我對(duì)這個(gè)方法不了解，第一次聽說(shuō)，所以就查了一下，不敢說(shuō)我查到的東西是真的或者是最好的，就說(shuō)一下我的想法：這個(gè)方法太浪費(fèi)時(shí)間了，單單是破碎細(xì)胞就要保溫一個(gè)小時(shí)！而且操作也不比我用的方法簡(jiǎn)單，試劑也不省，實(shí)在不適合我用，但不是說(shuō)不適合別人用。這些也只是我的想法，別人怎么看我就不知道了。 http://www.ceps.com.tw/ec/ecjnlarticleView.aspx?atliid=435190 |
10樓2011-06-15 17:03:09
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