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絲狀真菌提取總DNA問(wèn)題
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CTAB法提取真菌DNA最后用異丙醇沉淀后使用無(wú)菌水無(wú)法完全溶解沉淀,這事怎么回事? [ Last edited by cclday on 2011-6-14 at 08:39 ] |
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2.4.14.1真菌總DNA的提取 (1)接種菌株至液體培養(yǎng)基中,28℃,180rpm振蕩培養(yǎng)3天; (2)用滅菌紗布過(guò)濾,并壓干菌體; (3)將菌絲體倒入研缽(滅菌并預(yù)冷),迅速倒入液氮,研磨至粉末狀; (4)將粉末移至1.5mL的EP管中,加入600µL真菌提取液; (5)加等體積苯酚/氯仿,輕輕倒轉(zhuǎn)混合,10000rpm離心10min; (6)取400µL上清液移入新的1.5mlLEP管,重復(fù)步驟(5); (7)取上清液,加入兩倍體積無(wú)水乙醇,-20℃放置30min; (8)10000rpm 離心10min,75%乙醇洗沉淀2次,真空干燥; (9)以20µL 1×TE 溶解沉淀; (10)電泳檢測(cè)總DNA的濃度。 (5)DNA抽提液的配置 表 2.5 DNA抽提液的配置 成分 濃度 NaCl 200mmol/L EDTA-Na2 4mmol/L SDS 2% Tris-HCl(pH=8.0) 100mmol/L |

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我對(duì)這個(gè)方法不了解,第一次聽說(shuō),所以就查了一下,不敢說(shuō)我查到的東西是真的或者是最好的,就說(shuō)一下我的想法:這個(gè)方法太浪費(fèi)時(shí)間了,單單是破碎細(xì)胞就要保溫一個(gè)小時(shí)!而且操作也不比我用的方法簡(jiǎn)單,試劑也不省,實(shí)在不適合我用,但不是說(shuō)不適合別人用。這些也只是我的想法,別人怎么看我就不知道了。 http://www.ceps.com.tw/ec/ecjnlarticleView.aspx?atliid=435190 |

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