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絲狀真菌的基因敲除
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我最近要敲除掉曲霉里面的兩個基因，大概的方案如下： 單獨敲除1基因，單獨敲除2基因，以及將兩個基因都敲除，來研究他們的功能。單獨敲除一個基因的載體我都獲得了，是通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化的，可是不知道如何來進(jìn)行基因的雙敲除載體的構(gòu)建，不知道真菌里面有沒有雙交換的概念。有沒有做真菌基因敲除的高手啊，真是不慎感激�。� |
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【答案】應(yīng)助回帖
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scelab(金幣+5, EPI+1): 歡迎常來交流 2011-06-27 20:12:56
scelab(金幣+5, EPI+1): 歡迎常來交流 2011-06-27 20:12:56
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盡管你構(gòu)建了敲除一個基因的載體，但看來你不太明白敲除的原理，真菌基因敲除一般是基于同源重組技術(shù)的，也有基于隨機(jī)插入突變的。基因敲除方法可以參考文獻(xiàn)：“A high-throughput gene knockout procedure for Neurospora reveals functions for multiple transcription factors. Proc Natl Acad Sci USA 103: 10352–10357.” 建議你認(rèn)真研究一下你自己構(gòu)建載體的原理，如果你要進(jìn)行雙敲除的話，得選擇另一個篩選標(biāo)記，如hph和Bar等，載體構(gòu)建的方法和你敲除基因1的方法是相同的，只是把篩選標(biāo)記換成另一種！ 祝好運！ |
7樓2011-06-27 19:21:25
8樓2014-09-29 19:37:54
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