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[求助]
絲狀真菌的基因敲除
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我最近要敲除掉曲霉里面的兩個(gè)基因，大概的方案如下： 單獨(dú)敲除1基因，單獨(dú)敲除2基因，以及將兩個(gè)基因都敲除，來(lái)研究他們的功能。單獨(dú)敲除一個(gè)基因的載體我都獲得了，是通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化的，可是不知道如何來(lái)進(jìn)行基因的雙敲除載體的構(gòu)建，不知道真菌里面有沒(méi)有雙交換的概念。有沒(méi)有做真菌基因敲除的高手啊，真是不慎感激啊！ |
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jinkui960
至尊木蟲(chóng) (知名作家)
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【答案】應(yīng)助回帖
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scelab(金幣+5, EPI+1): 歡迎常來(lái)交流 2011-06-27 20:12:56
scelab(金幣+5, EPI+1): 歡迎常來(lái)交流 2011-06-27 20:12:56
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盡管你構(gòu)建了敲除一個(gè)基因的載體，但看來(lái)你不太明白敲除的原理，真菌基因敲除一般是基于同源重組技術(shù)的，也有基于隨機(jī)插入突變的�；蚯贸椒ǹ梢詤⒖嘉墨I(xiàn)：“A high-throughput gene knockout procedure for Neurospora reveals functions for multiple transcription factors. Proc Natl Acad Sci USA 103: 10352–10357.” 建議你認(rèn)真研究一下你自己構(gòu)建載體的原理，如果你要進(jìn)行雙敲除的話，得選擇另一個(gè)篩選標(biāo)記，如hph和Bar等，載體構(gòu)建的方法和你敲除基因1的方法是相同的，只是把篩選標(biāo)記換成另一種！ 祝好運(yùn)！ |
7樓2011-06-27 19:21:25
syn1985
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zff912
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3樓2011-05-25 17:06:22
gumingzhu
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4樓2011-06-27 14:11:28
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