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111602木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
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[交流]
線性化及完整的質(zhì)粒電泳問(wèn)題。 已有8人參與
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最近在做實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，遇到要將質(zhì)粒先線性化，發(fā)現(xiàn)用酶切后電泳，與未酶切的質(zhì)粒相比，跑的速度要快，不知是何原因，這些質(zhì)粒都非空載，有些不理解，一般線性后跑的速度應(yīng)該比超螺旋快才對(duì)啊。請(qǐng)高手指教！ 首先感謝各位的討論和建議。但必須說(shuō)明一點(diǎn)，這個(gè)質(zhì)粒是重組的，而且選擇的酶只有一個(gè)酶切位點(diǎn)，電泳用的是1% AGAROSE GEL. 120V 30MIN.并且可以肯定已經(jīng)被線性化的了。因?yàn)楹罄^實(shí)驗(yàn)如果沒(méi)有被線性化是無(wú)法成功的。 大家的回答都是建立在理論分析基礎(chǔ)上的。我也贊同這一理論，但不知道有沒(méi)有真正做過(guò)這一實(shí)驗(yàn)的朋友，可能我的實(shí)驗(yàn)（電泳）出了問(wèn)題，但希望有實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)的朋友給點(diǎn)意見(jiàn)。 [ Last edited by 111602 on 2011-4-21 at 01:42 ] |
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xiaoweiwei121
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西瓜(金幣+5, EPI+1): 太牛了！實(shí)踐是檢驗(yàn)真理的唯一標(biāo)準(zhǔn)哦！話說(shuō)區(qū)長(zhǎng)MM睡這么晚會(huì)長(zhǎng)痘痘滴…… 2011-04-21 23:38:07
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西瓜(金幣+5, EPI+1): 太牛了！實(shí)踐是檢驗(yàn)真理的唯一標(biāo)準(zhǔn)哦！話說(shuō)區(qū)長(zhǎng)MM睡這么晚會(huì)長(zhǎng)痘痘滴…… 2011-04-21 23:38:07
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這個(gè)可不一定，也不要在什么情況下都說(shuō)超螺旋跑的快，首先要搞清楚它為什么會(huì)跑的快，他有他的決定因素。并不是在任何情況下都是這樣的。我們不是在比拼理論知識(shí)，而是為了解決我們?cè)囼?yàn)中確實(shí)存在問(wèn)題，我做過(guò)類似的 線性跑的比超螺旋要快 建議樓主換個(gè)0.7-0.8%膠跑一下看看（濃度一定要準(zhǔn)哦），電壓不用太高，看看結(jié)果如何，然后我們?cè)賮?lái)討論 曾經(jīng)看過(guò)一個(gè)解釋：膠濃度小，則孔徑大，超螺旋的跑的阻力小，就快些。而膠濃度大，則孔徑小，超螺旋的跑的阻力大，就慢些。而線性片段的快慢與分子量有關(guān)，不受濃度的影響。 超螺旋的速度是可以變化的，與膠濃度有關(guān)，與分子量無(wú)關(guān)。 超螺旋的速度還和凝膠中的EB有關(guān)系（如果你沒(méi)加的，那就算了） 我的一個(gè)實(shí)驗(yàn)圖片，哪個(gè)是酶切的，哪個(gè)是質(zhì)粒對(duì)照樓主應(yīng)該能看出來(lái) 膠的濃度大于1% [ Last edited by xiaoweiwei121 on 2011-4-21 at 03:27 ] |
18樓2011-04-21 03:04:06
111602
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1949stone: 我也沒(méi)理解 那個(gè)問(wèn)題 哈哈臉紅ing 2011-04-20 11:23:35
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1949stone: 我也沒(méi)理解 那個(gè)問(wèn)題 哈哈臉紅ing 2011-04-20 11:23:35
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此鏈接說(shuō)的不無(wú)道理，首先明確的是超螺旋是跑的最快的，可是線性和環(huán)狀相比誰(shuí)快一點(diǎn)，個(gè)人還是認(rèn)為開(kāi)環(huán)的跑得快。。。 詳情請(qǐng)參見(jiàn) 基因操作原理第六版（Principles of Gene Manipulation） 瞿禮嘉 顧紅雅 譯 第45--47頁(yè) |
9樓2011-04-20 11:03:31
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dhd997(金幣+2): 你是對(duì)的 2011-04-20 10:51:17
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dhd997(金幣+2): 你是對(duì)的 2011-04-20 10:51:17
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http://zhidao.baidu.com/question/211352024.html 你覺(jué)得呢？超螺旋是跑的最快滴！ |
7樓2011-04-20 10:37:47
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dhd997(金幣+2): 有理有據(jù)，歡迎交流 2011-04-20 10:51:34
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8樓2011-04-20 10:49:36
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