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yuxia82012木蟲 (著名寫手)
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[求助]
板上有做過Gel-shift的朋友沒？
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最近準(zhǔn)備做這個(gè)，主要是檢驗(yàn)蛋白和DNA的結(jié)合作用，我是把可能結(jié)合的DNA合成為5‘-Biotin的引物，表達(dá)蛋白反應(yīng)后再跑聚丙烯酰胺的非變性膠，后面用照膠儀檢測熒光，由于是第一次做，也沒什么經(jīng)驗(yàn)，不知道各位有什么建議以及注意事項(xiàng)沒？ 還有一點(diǎn)不確定的是這個(gè)蛋白結(jié)合DNA位點(diǎn)是結(jié)合雙鏈的還是單鏈的，如果是雙鏈的，我能不能合成一對互補(bǔ)引物通過退火是她們變成雙鏈再反應(yīng)？ |
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1.標(biāo)記的探針與結(jié)合蛋白需要在室溫下結(jié)合一段時(shí)間，一般為10-20分鐘。 2.如果是檢驗(yàn)可能的結(jié)合還需要做探針的冷競爭反應(yīng)。 3.注意下電泳時(shí)間和轉(zhuǎn)膜的時(shí)間，如果你是用干膠儀的話就需要注意電泳的時(shí)間，一般為10v/cm.。 4.結(jié)合實(shí)驗(yàn)需要用雙鏈的探針，可以使用退火的雙鏈探針。 |
2樓2011-04-20 21:45:25
yuxia82012
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